Саркоцистоз крупного рогатого скота

     При высокой интенсивности саркоцистозной инвазии в мышечной ткани отмечается гипогликемия. В процессе хранения в таком мясе содержание гликогена уменьшается менее интенсивно, чем в мясе от здоровых животных. В связи с этим отрицательное влияние заселения саркоцистами мышечной ткани на процесс послеубойного гликолиза не исключается.

     Содержание молочной кислоты. Нарастание гипогликемии с увеличением степени саркоцистозной инвазии, а также уменьшение содержания мышечного гликогена в процессе хранения мяса от пораженных животных оказывает определенное влияние на накопление в мясе молочной кислоты. Меньшее количество молочной кислоты в мышцах определяется при сильной степени саркоцистозной инвазии. Накопление молочной кислоты в процессе хранения мяса, в различной степени инвазированного саркоцистами, проходит менее интенсивно, чем в мясе от здоровых животных.

     Количество молочной кислоты в мышцах увеличивается одновременно с уменьшением содержания гликогена в процессе хранения мяса. На значение обоих показателей, безусловно, влияет интенсивность саркоцистозной инвазии. Наибольшее количество молочной кислоты вне зависимости от степени заселения туш саркоцистами отмечается на вторые сутки хранения мяса при t=l—3°С.

     Величина рН и пероксидазная проба. Согласно И. А. Смородинцеву (1939), В. И. Соловьеву (1965), величина рН и показатели перок-сидазной пробы связаны с накоплением молочной кислоты в мышцах. Учитывая это, рН и пероксидазную активность определяли через 48 ч после убоя животных и хранения мяса при t=l—3°С. При сильной степени саркоцистозной инвазии величина рН мяса составляла 6,5—6,8, пероксидазная проба была отрицательной. При средней степени саркоцистозной инвазии рН и пероксидазная активность изменялись меньше, а при слабой инвазии были такими же, как и в мышцах здоровых животных.

     Следовательно, поражение мышц саркоцистами ведет к уменьшению содержания в них гликогена и молочной кислоты.

     Также к физико-химических показателей качества говядины при саркоцистозе относятся показатели, характеризующие качество говядины: содержание воды (свободной и связанной), влагоудерживающая способность, количество внутримышечного жира, соотношение триптофана и оксипролина, нежность мяса.

     При сильной и средней интенсивности саркоцистозной инвазии в говядине содержится меньше связанной воды и внутримышечного жира, свободной воды и оксипролина — больше, чем в мясе здоровых животных.

     Уменьшение содержания внутримышечного жира и незаменимых аминокислот, увеличение доли соединительной ткани у пораженных саркоцистозом животных отрицательно влияет на выход и питательность мяса.

     Одним из наиболее достоверных показателей качества мяса является количество воды, связанной с белками мышц. Эта форма воды оказывает существенное влияние на нежность мышц, которую принято измерять в см²/г азота. При сильной степени саркоцистозной инвазии нежность мяса достигала 248,3, при средней — 267,2, при слабой — 285, у здоровых животных — 297 см²/г азота. Следовательно, при высокой интенсивности саркоцистозной инвазии нежность мяса снижалась на 48,7 см²/г азота по сравнению с нежностью мяса здоровых животных.

     В результате специальных исследований установлено, что мясо, сильно инвазированное саркоцистами, после 36—48 ч хранения при t=17—18°С значительно теряет упругость мышечных волокон, становится на разрезе матового цвета, липким, некоторые пробы обнаруживают гнилостный запах, сухожилия приобретают сероватый цвет, покрываются слизью; бульон из такого мяса мутный. Бактериоскопия выявляет в мясе микроорганизмы палочковидной формы. В световой микроскоп нередко видны распавшиеся мышечные волокна. Мясная вытяжка мутная, величина рН 6,6—6,9, пероксидазная проба отрицательная. Аминоаммиачного азота содержится 108,0 мг%. При добавлении к бульону или мясной вытяжке 5% водного раствора медного купороса образуются хлопья, иногда — желе сине-голубого или зеленого цвета. При средней степени поражения скелетных мышц саркоцистами такие изменения отмечались после 56,0+8,0 ч, а при слабой инвазии в мясе здоровых животных — после 72,0+12,0 ч хранения.

     Таким образом, быстрая порча мяса, пораженного саркоцистами, по-видимому, обусловливается повышением содержания в нем воды, снижением количества гликогена и активности гликолитических ферментов, а следовательно, и гидролиза гликогена до молочной и других кислот. В конечном итоге это способствует ускоренному развитию в мясе, пораженном саркоцистами, патогенной микрофлоры.

1.8.3. Бактериологического исследования.

     В результате поражения саркоцистозом и ослабления защитных функций в организме крупного рогатого скота возникают условия для интенсивного обсеменения печени, лимфатических узлов и скелетных мышц такими бактериями, как CL.perfringens, сальмонеллами, кишечной палочкой, стафилококками. При этом обсемененность этих органов CL.perfringens, кишечной палочкой, коагулазоположи-тельными стафилококками находится в прямой зависимости от инва-зирования туш саркоцистами. Штаммы СL.perfringens, образующие теплоустойчивые споры, и серотипы кишечной палочки 026, 056, 078 и другие, потенциально опасные для человека и молодняка животных, высеваются из мышц, лимфатических узлов и печени туш, сильно и средне инвазированных саркоцистами. Поэтому необходимо проводить микробиологическое исследование саркоцистозного мяса.

     Идентификация Clostridium perfringens. Пробы кусочков мышц, печени, лимфатических узлов отбирали через 1,5—2 ч после убоя животных, растирали их в ступках с 10-кратным количеством стерильной воды. Первичный посев производили на сульфитполимиксиннеомициновую среду и инкубирован 24—36 ч при t = 37°C, затем пересевали на среду Кейслера с последующим выращиванием на протяжении 18—24 ч при такой же температуре в анаэростатах. Колонии, морфологически сходные с CI. perfringens, пересевали на среду Китт-Тароцци с 0,5% раствором глюкозы. Инкубировали 18—24 ч при t = 37°C и проверяли на чистоту путем микроскопического исследования мазков и посевов на среду Гисса. Принадлежность выделенных микробов к CI. perfringens определяли на основании морфологических, культурально-биохимических и токсигенных свойств.

     Вёвиду длительности, громоздкости и относительно недостаточной эффективности указанных средств применяли также среду ГАН-3 в прописи И. С. Загаевского (1970). Для приготовления среды ГАН-3 в 1 л стерильного обезжиренного молока растворяли 100 г желатина, 20 г глюкозы, 5 г натриевой селитры, добавляли 10 мл 10% водного раствора хлористого железа. Смесь дважды подогревали (через день) текучим паром. При рН 7,3—7,4 добавляли 500 тыс. ЕД полимиксина. Затем среду разливали по 5 мл в стерильные пробирки. Посевы делали уколом пастеровской пипетки в застывший столбик среды, поверхность которого после посева покрывали слоем парафина толщиной в 1 — 1,5 см. Инкубировали при t = 38°C. При наличии Сl.perfringens через 8—12 ч от момента посева происходило разжижение желатина с образованием черного губчатого сгустка казеина. Вследствие бурного газообразования выталкивались парафиновые пробки. Отмечалась положительная реакция на нитрит с реактивом Гисса. Результаты высевов на средах ГАН-3, Кит-Тароцци соответствовали в 95,8,± + 1,2% случаев.

     Идентификация сальмонелл и кишечной палочки. Пробы вытяжек из лимфатических узлов и мышц наносили на стерильные полоски фильтровальной бумаги размером 100x25 мм, которые затем помещали в стерильные пробирки, подсушивали в термостате 3—4 ч при t = 37°C и хранили в бытовом холодильнике в течение 2—5 недель. С целью идентификации сальмонелл и кишечной палочки в пробирки наливали по 10 мл 1% раствора глюкозы (рН 7,3—7,4), инкубировали 3—4 ч при t = 37°C, затем образцы содержимого пробирок высевали на среду Эндо, в которую для усиления эффективности добавляли 0,05% резорцина.

     Результаты  исследования 302 проб печени, лимфатических  узлов и мышц, взятых через 1,5—2 ч  после убоя животных и хранившихся  в течение 2 мес, и проб вытяжек  из этих органов, впитанных на полосках фильтровальной бумаги, совпали в 97,0±2,0% случаев.

     Для выделения сальмонелл и кишечной палочки из лимфатических узлов  и мышц применяли также методику парафиновых блоков, разработанную И. С. Загаевским (1967). Лимфатиечские узлы и пробы мышц весом 50—70 г обжигали на грелке, помещали в стерильные фарфоровые чашки и заливали расплавленным парафином, предварительно нагретым до 170—200°С, затем остуженным до 50—52°С. Пробы в парафиновых блоках выдерживали   в   термостате 12 ч   при t = 47°C. После этого их вскрывали, -разрезая на две части, и жидкостью, выделенной в местах разрезов, увлажняли среду Эндо в чашках Петри, затем инкубировали ее 18—24 ч при t = 37°C.

     На  среде Эндо бактерии группы кишечной палочки Е. coli в большинстве случаев образуют красные колонии со светло-розовым ободком, а в 10% случаев — темно-красные колонии с металлическим блеском. При дифференциации Е. coli от A. aerogenes, формирующей на среде Эндо розовые или бесцветные колонии, напоминающие колонии сальмонелл, учитывали, что Е. coli подвижна, не разжижает желатин, образует индол, не ферментирует сахарозу и соль лимонной кислоты, не образует ацетилметилкарбинол; в то время как A. aerogenes— палочка неподвижная, образует ацетилметилкарбинол, ферментирует сахарозу, не образует индол, усваивает соль лимонной кислоты.

     Пробирочную реакцию агглютинации ставт при разведении сывороток от 1:100 до титра. Пробирки со взвесью живой культуры и разведенными сыворотками выдерживали 2 ч при t = 37°C, затем сушили при комнатной температуре. Пробирки с подогретой культурой помещали в термостат на 20 ч при t = 37°C, после чего производили учет. Положительной реакцией считали крупнохлопчатую агглютинацию с живой культурой в разведении 1:200—1:1 400 и мелкозернистую агглютинацию с подогретой  культурой  в разведении  1:800—1:1 600.

     Идентификация стафилококков. Посев исследуемого материала производили в чашках Петри на МПА, содержащем 2% NaCl, 2% глюкозы и 10% свежей дефибринированной крови крупного рогатого скота. Кроме того, из расчета на 1 мл среды добавляли 300 тыс. ЕД полимиксина и 0,25 мг сорбината натрия; рН среды 7,4. Образцы мышц и органов растирали стеклянными палочками с резиновыми наконечниками в пробирках со стерильным физиологическим раствором. Инкубировали 24—48 ч при t = 37°C, после чего изучали морфологические, культуральные и биологические свойства стафилококков.

     Реакции плазмокоагуляции и  гемолиза. Для реакции плазмокоагуляции свежеполученную кровь кролика разводили в колбе со стерильным раствором лимоннокислого натрия в соотношении 1:5, тщательно перемешивали со стеклянными бусами, затем плазму центрифугировали, разводили физиологическим раствором в соотношении 1:4, разливали в стерильные пробирки по 1 мл и добавляли по 2 капли суточной агаровой культуры стафилококков. Пробирки выдерживали в течение суток в термостате при t = 37°C, просматривая их через 2, 6, 12 и 24 ч. При просмотре учитывали и полную коагуляцию плазмы, и образование небольших сгустков. Положительными оказались 92 стафилококковые культуры, отрицательными — 28, коагулировали плазму в течение 2—6 ч — 22, 7—12 ч — 25, 13—24 ч — 17 культур. Стафилококки, коагулирующие плазму в течение 2—6 ч, выделялись из печени, лимфатических узлов и мышц при сильном и среднем инвазировании туш саркоцистами. Стафилококки, выделенные из мышц при слабом инвазировании саркоцистами, а также от здоровых животных, коагулировали плазму в течение 16—24 ч.

     Учитывая, что одним из характерных свойств патогенных стафилококков является продуцирование гемолизина в полуанаэробных условиях, также используют реакцию гемолиза. Ее постановку проводят на среде П-4, предложенной И. С. Загаевским (1970). Для этого в 500 мл мясного бульона растворяли 10 г хлористого натрия, 30 г питательного агара (в порошке), 0,8 г углекислого натрия. Смесь дважды прогревали (через день) 30 мин текучим паром при t = 100°C, затем добавляли 10 г глюкозы, 5 г маннита, 0,25 г сорбината натрия и кипятили 5 мин. Устанавливали рН 7,3—7,4 и перед разливом в чашки Петри добавляли при t = 47—48°С 10% свежей дефибринированной крови крупного рогатого скота.

     Поверхность остывшего агара увлажняли свежими разрезами печени, мышц или лимфатических узлов туши. Затем разливали среду, охлажденную до 45—47°С, выдерживали 24—48 ч при t= +37°С. При наличии патогенных стафилококков в толще среды вокруг колоний микробов образуется зона гемолиза. Сапрофитные стафилококки в этих условиях обычно не развиваются. Совпадение результатов реакции гемолиза, проведенной на среде И. С. Загаевского, и коагулазной пробы отмечалось в 98+2% случаев.

1.8.4. Методы выявления саркоцист.

1.8.4.1. Компрессионный метод.

     Для обнаружения   микросаркоцист у  всех видов   животных   берут  пробы мышц различных   органов    (сердца, пищевода, диафрагмы,     скелетных мышц и др.). Из каждой   пробы по ходу мышечных волокон изогнутыми ножницами готовят по 4 среза величиной с овсяное зерно (И. И. Вершинин, 1982). Срезы сдавливают стеклами компрессориума и исследуют при малом увеличении под световым микроскопом. Для лучшего выявления саркоцист предложен ряд способов окрашивания срезов из мышц. С. А. Лубянецкий окрашивал срезы мышц раствором краски Гимза (1—2 капли   на 1 мл дистиллированной воды) или метиленовой синью в разведении 1:1000 в течение 60 минут  с  последующим обесцвечиванием окрашенных срезов нашатырным спиртом и промыванием водой. Г. В. Кононенко (1968) моди-фицировал метод окраски срезов по С. А. Лубянецкому: к 30 мл 10% раствора метиленовой сини он добавлял 30 мл 0,01% раствора КОН, а полученную смесь разбавлял дистиллированной водой в соотношении 1:1, окрашивал срезы в течение 10 минут и обесцвечивал их раствором аммиака. А. Г. Какурина (1976, 1978) на мышечные срезы, сдавленные в компрес-сориуме, предложила наносить на 5—10 минут по 2—3 капли смеси, приготовленной из равных частей 0,5% водного раствора метиленовой сини и ледяной уксусной кислоты (85%). Затем спезы обесцвечивают 2—3 каплями 20—25% раствора нашатырного спирта, промывают дистиллированной водой и просматривают при малом увеличении: на голубом фоне мышечной ткани саркоцисты выглядят темно-синими.