Автор работы: Пользователь скрыл имя, 29 Января 2015 в 18:08, контрольная работа
Современное представление о нуклеоиде микробной клетки и внехромосомных факторах наследственности.
Патологический материал, правила отбора, пересылки и микробиологическое исследование его на паратуберкулез.
Дифференциация микобактерий паратуберкулезного энтерита крупного рогатого скота от микобактерий туберкулеза.
Общая характеристика бактериальных вакцин, применяемых в ветеринарной практике, принцип приготовления и контроля живых и убитых вакцин (на примере конкретных вакцин).
Ознакомьтесь и опишите работу ветеринарной лаборатории, обслуживающей ваш участок.
Подготовка к исследованию
Из каждого отдела головного мозга (аммонова рога, мозжечка, коры больших полушарий и продолгаватого мозга) готовят по два препарата- мазка-отпечатка.
Не допускаются для исследования пробы, концервированые глицерином, фиксированые этиловым спиртом, формалином и другими средствами, вызывающими денатурацию и разрушение антигенов или создающими дополнительный («свой») фон свечения.
Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в охлажденом ацетоне ghb +4 или -12°С в течении 4-12 часов. Затем препараты извлекают из ацетона, высушивают на воздухе 10-15 мин и помещают их во влажную камеру (чашки Петри с увлажненным дном).
Диагностический антирабистический флуоресцирующий иммуноглобулин (ДАФИ) в рабочем разведении наносят равномерно на всю поверхность препарата при помощи пипетки (примерно 0,1 см3 на один препарат) закрывают камеру с препаратами, помещают в термостат и выдерживают 30 мин при 37°С. Затем предметные стекла с препаратом троекратно промывают, погружая их каждый раз на 10 мин в сосуд, наполненый фосфатным буфером рН 7,4 промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
На окрашенные препараты наносят иммерсионное нефлуоресцирующее масло.
Проведение исследования
Подготовленные препараты просматривают под люминесцентным микроскопом с иммерсионной системой.
Обработка результатов
При положительных результатах исследования в препаратах, содержащих антиген вируса бешенства, обнаруживают разной величины и формы ярко-светящиеся желто-зеленым цветом гранулы в нейронах и вне клеток. Размер их колеблется от едва заметных в виде песчинок образований до 15-20мм.
Метод биологической пробы
Сущность метода заключается в выделении вируса от больных убитых или павших животных путем инокулирования патологического материала белым мышам и последующей его идентификации.
Биопробу проводят, если выявление рабического антигена методом иммунофлуоресценции (или РП и определение телец Бабеша-Негри) в первичном материале окажется отрицательным, (как получилось в нашем случае).
Аппаратура, материалы и растворы
Подготовка к исследованию
Материал для заражения мышей готовят из равных частей нервной ткани аммонова рога, мозжечка, коры полушарий, продолговатого мозга.
Ткань измельчают ножницами и растирают в ступке (или гомогенизаторе), постепенно прибавляя нейтральный физиологический раствор до получения 10%-ной суспензии.
Суспензию центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 5-10 минут. Надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку и хранят в холодильнике при температуре 0-4°С до ее использования. При подозрении на бактериальную нестерильность в суспензию добавляют 500МЕ пенициллина и 500 МЕ стрептомицина на 1 см3 суспензии и затем выдерживают ее при комнатной температуре 30 мин.
Проведение исследования
Для биопробы берут белых лабораторных мышей массой 16-20 г или сосунков в возрасте 20-25 сут массой 6-8г.
Мышей заражают подготовленной суспензией интрацеребрально в дозе 0,015-0,03см3 в зависимости от массы мышей или подкожно в верхнюю губу в дозе 0,1-0,2 см3 .
На одну биопробу заражают 6-10 мышей.
Зараженых мышей помещают в клетки или банки, на которые наклеивают этикетку с указанием даты заражения, количества мышей, способа заражения и номера экспертизы. Горловину банки накрывают сеткой, препятствующейпроникновению насекомых.
Зараженных мышей осматривают ежедневно в течение 30 сут Количество здоровых, больных и погибших мышей регистрируют в журнале.
Обработка результатов.
При оценке результатов учитывают проявление клинических признаков у зараженных мышей: взъерошеность шерсти, тремор, нарушение координации движений, паралич, прострация.
Гибель зараженных мышей в срок до 48 ч не учитывают в оценке результатов. От мышей, павших после указаного срока, головной мозг можно исследовать опять же методом иммунофлуоресценции и другими(метод подавления иммунофлуоресценции, реакции преципитации, метод выявления телец бабеша-негри).
Итак, биологическую пробу на бешенство считают положительной, если в препаратах из мозга зараженных мышей обнаруживают тельца Бабеша-Негри или выявляют антиген методами имунофлуорресценции или в реакции преципитации.
Отрицательный диагноз на бешенство может быть дан только по истечении 30-суточной постановки биопробы при отсутствии специфической гибели мышей.