Шпаргалка по "Микробиологии"

К поверхностным структурам бактерий (необязательным, как и клеточная  стенка), относятся капсула, жгутики, микроворсинки.

Капсула или слизистый слой окружает оболочку ряда бактерий. Выделяют микрокапсулу, выявляемую при электронной микроскопии в виде слоя микрофибрилл, и макрокапсулу, обнаруживаемую при световой микроскопии. Капсула является защитной структурой (прежде всего от высыхания), у ряда микробов- фактором патогенности, препятствует фагоцитозу, ингибирует первые этапы защитных реакций- распознавание и поглощение. У сапрофитов капсулы образуются во внешней среде, у патогенов- чаще в организме хозяина. Существут ряд методов окраски капсул в зависимости от их химического состава. Капсула чаще состоит из полисахаридов (наиболее распространенная окраска- по Гинсу), реже- из полипептидов.

Жгутики. Подвижные бактерии могут  быть скользящие (передвигаются по твердой поверхности в результате волнообразных сокращений) или плавающие, передвигающиеся за счет нитевидных спирально изогнутых белковых (флагеллиновых по химическому составу) образований- жгутиков.

По расположению и количеству жгутиков выделяют ряд форм бактерий.

1.Монотрихи - имеют один полярный  жгутик.

2.Лофотрихи - имеют полярно расположенный  пучок жгутиков.

3.Амфитрихи - имеют жгутики по  диаметрально противоположным полюсам.

4.Перитрихи - имеют жгутики по  всему периметру бактериальной  клетки.

Способность к целенаправленному  движению (хемотаксис, аэротаксис, фототаксис) у бактерий генетически детерминирована.

Фимбрии или реснички - короткие нити, в большом количестве окружающую бактериальную клетку, с помощью  которых бактерии прокрепляются  к субстратам (например, к поверхности  слизистых оболочек). Таким образом, фимбрии являются факторами адгезии и колонизации.

7. особенности строения плесневых грибов.

Грибы и простейшие имеют четко  ограниченное ядро и относятся к  эукариотам. Грибы крупнее бактерий, в эволюционном плане близки к  растениям (наличие клеточной стенки, содержащей хитин или целлюлозу, вакуолей с клеточным соком, неспособность  к перемещению, видимое движение цитоплазмы). Ядерный материал грибов отделен от цитоплазмы ядерной мембраной. Дрожжевые грибы образуют отдельные овальные клетки. Плесневые грибы формируют клеточные нитеподобные структуры- гифы. Мицелий- переплетение гифов- основная морфологическая структура. У низших грибов мицелий одноклеточный, не имеет внутренних перегородок (септ). Грибы размножаются половым и бесполым (вегетативным) способом. При вегетативном размножении образуются специализированные репродуктивные структуры - споры - конидии. Они могут располагаться в специализированных вместилищах - спорангиях (эндоспоры) или отшнуровываться от плодоносящих гиф (экзоспоры). Реже наблюдают образование спор внутри клеток (оидии), являющихся сегментами гиф. Дрожжевые клетки размножаются почкованием, мицелий не образуют. Половое размножение включает взаимодействие специализированных клеток, имеющих существенные различия в морфологии у различных грибов и часто используемых как дифференциально- диагностический признак.

Для большинства видов грибов, имеющих  медицинское значение, характерно наличие  конидий (или экзоспор), являющихся формами неполового размножения. Их классификация во многом основывается на морфологических формах конидий. Их наиболее частые формы- бластопоры, хламидоспоры, артроспоры, конидиоспоры.

Бластоспоры - простые структуры, котрые образуются в результате почкования, с последующим отделением почки  от родительской клетки, например у  дрожжевых грибов.

Хламидоспоры образуются в результате увеличения гифальных клеток с образованием толстой оболочки, защищающей споры  от неблагоприятных условий окружающей среды.

Артроспоры - споры, образующиеся путем  фрагментации гиф на отдельные клетки. Они встречаются у дрожжеподобных грибов, возбудителя кокцидиоидоза, тканевых форм дерматофитов в волосе, кожных чешуйках и в ногтях.

Конидиоспоры - зрелые наружные споры, возникающие на дифференцированных конидиофорах (конидионосцах), отличающихся от других нитей мицелия по форме  и размерам (у аспергилл, пеницилл) или располагающиеся по бокам  и на концах любой ветви мицелия, прикрепляясь к ней непосредственно  или тонкой ножкой.

К эндоспорам совершенных грибов относятся  спорангиоспоры мукоровых грибов, развивающихся  в специальных органах (спорангиях), располагающихся на вершине спорангиеносца. Споры освобождаются при разрыве  стенки спорангия.

Эндоспоры обнаруживают также у  тканевых форм возбудителей кокцидиоидоза. Они развиваются в круглых  образованиях - сферулах, при разрыве  стенки зрелой сферулы попадают во внешнюю среду.

Основное функциональное отличие  спор у бактерий и грибов: у бактерий споры обеспечивают переживание  в неблагоприятных условиях окружающей среды, у грибов образование спор- способ размножения.

8. окраска по Грамму.

Окрашивание по Граму. Этот метод позволяет все микроорганизмы разделить на две группы: грамположительные (гр+) и грамотрицательные (гр–).

Техника окраски:

1. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги пропитанной 1%-ым спиртовым раствором генцианвиолета. Наносят на бумажку 2-3 капли воды. Окрашивают 2-3 минуты.
2. Бумажку снимают и не промывая препарата водой, наносят раствор Люголя на 2 минуты.
3. Сливают раствор Люголя и препарат обрабатывают 96%-ным этиловым спиртом в течение 20-30 секунд.
4. Тщательно промывают мазок водой.
5. Окрашивают мазок фуксином Пфейффера в течение 2-3 минут.
6. Препарат промывают водой.
7. Высушивают и микроскопируют.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в розовый. Сущность окраски по Граму состоит в том, что отношение к краскам зависит от химического состава клетки и структурных особенностей клеточной стенки (наличие муреина и частично липида). В составе клеточной стенки грамположительных микроорганизмов большое количество муреина, воздействие этиловым спиртом вызывает разбухание муреина, что приводит к уменьшению диаметра пор и снижению проницаемости клеточной стенки. Поэтому не происходит вымывания красителя и обесцвечивания микробной клетки. В клеточной стенке грамотрицательных микроорганизмов муреиновый слой меньших размеров, диаметр пор больше и спирт легко проходит через клеточную стенку, вымывая краситель. Микробная клетка принимает цвет дополнительного красителя (красный). Кроме того, в поверхностном слое грамположительных микроорганизмов находиться магниевая соль рибонуклеиновой кислоты, которая в присутствии йода в кислой среде образует прочное соединение с основными красителями. Это так же препятствует обесцвечиванию их спиртом.

 

9. Окраска по Цилю-Нильсену.

Окраска по Циль-Нильсену.

1. Фиксированный на пламени  мазок покрывают полоской фильтровальной  бумаги, наливают на нее карболовый  раствор фуксина и подогревают;  при появлении паров прекращают  нагревание и оставляют краску  на препарате еще на несколько  минут (2—3 минуты). Дав препарату  остыть, удаляют пинцетом бумажку  и обмывают мазок водой.

2. Обесцвечивают препарат 5—10% водным  раствором серной кислоты в  течение 3—5 секунд (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной кислоты можно применить 5% раствор азотной или 3% раствор соляной кислоты.

3. Мазок тщательно промывают водой.
4. Споласкивают 96°спиртом.

5.    Снова промывают водой.

6.  Докрашивают в течение 3—5  минут леффлеровской метиленовой  синькой или водным раствором  1: 1000 малахитовой зелени или метиловой зелени.

7.   Краску смывают водой  и препарат высушивают.

Микроскопическая картина: туберкулезные  палочки -  рубиново красные, остальные, за исключением возбудителя паратуберкулеза, кислото -  и спиртоустойчивых сапрофитов, - синие. Для обесцвечивания мазков при окраске по Циль-Нильсену вместо растворов кислот и спирта особо  рекомендуется применение солянокислого  алкоголя (соляной кислоты 3 мл+96°  спирта 97 мл) до слабо заметного розоватого оттенка препарата. После этого мазок ополаскивают водой и докрашивают метиленовой синькой и т. д. по основной прописи. Указанным методом достигается одновременное испытание бацилл на кислото - и спиртоустойчивость. Среди видов кислотоустойчивых сапрофитов встречаются спиртоподатливые разновидности, палочки же туберкулеза и паратуберкулеза всегда кислото - и спиртоустойчивы.

10. Окраска спорообразующих микроорганизмов.

Окраска   спор. При неблагоприятных условиях для микробов (отсутствие питательной среды, высушивание, неблагоприятная температура и др.) в цитоплазме некоторых микроорганизмов образуются споры. Формируются они внутри вегетативной клетки, являясь эндоспорами. Палочковидные грамположительные микроорганизмы, образующие округлые споры, диаметр которых не превышает ширину микробной клетки, относятся к роду Bacillus и называются бациллами. Микроорганизмы рода Clostridium имеют споры диаметр которых превышает ширину микробной клетки и называются клостридиями. По форме они бывают овальные и круглые.

Споры устойчивы к воздействию  высоких температур, химических веществ, к высыханию, длительно сохраняются  в почве, что объясняется их особым строением и химическим составом, в особенности ее оболочки. Поэтому  споры стойки к действию красителей.

Все методы окраски спор основаны на обеспечении проникновения красителя  через трудноокрашиваемую оболочку споры. Поэтому применяют протраву. После охлаждения оболочка вновь  становится плотной и не пропускает дополнительный краситель. 

11. определение подвижности микроорганизмов.

Определение подвижности  бактерий.

 Подвижности бактерий важный  видовой признак  и производиться  при диагностических исследованиях:  результат учитывают при идентификации  микроорганизмов. У подвижных  видов способность самостоятельного  поступательного (и вращательного)  движения обусловлена наличием жгутиков - специальных тонких нитевидных образований.

Жгутики бывают различной длины.

Их диаметр настолько мал, что  они невидимы в световом микроскопе (менее 0,2 мкм). У разных групп бактерий количество и расположение жгутиков неодинаково. Жгутики плохо воспринимают красители.  Методы сложной окраски  искажают подлинный вид жгутиков, поэтому в лабораториях окраску  жгутиков не осуществляют, а исследуют  бактерии в живом состоянии. В  зависимости от расположения и количества жгутиков микробы подразделяют:

а) монотрихи - микроорганизмы, имеющие на одном из полюсов один жгутик, движения активные, поступательные (псевдомонас);

б) лофотрихи - микробы, имеющие на одном из полюсов пучок жгутиков (листерии);

в) амфитрихи - микробы, имеющие жгутики на обоих полюсах микробной клетки;

г) перитрихи - микробы, у которых жгутики расположены по всей поверхности клетки(E.coli).

Есть виды микроорганизмов, обладающие подвижностью, но жгутиков не имеют (спирохеты, лептоспиры). Их движение обусловлено  импульсивными сокращениями двигательного  фибриллярного аппарата микробной  клетки.

 Для определения подвижности  у бактерий необходимо использовать  культуру не старше суточного  возраста, так как старые культуры  утрачивают способность передвигаться.

Определение подвижности  бактерий методом «висячая капля».  Каплю молодой (18-20 часовой) бульонной культуры бактерий бактериологической петлей наносят на покровное стекло. Специальным предметным стеклом с углублением (луночкой) накрывают каплю культуры так, чтобы покровное стекло с каплей находилось в центре луночки и прилипло к предметному стеклу (края луночки предварительно слегка смазывают вазелином). Препарат перевертывают стеклом вверх, и капля «повисает» над луночкой (рис. 8). Препарат микроскопируют при затемненном поле зрения, сначала при малом, затем при среднем или большом увеличении. На светлом фоне микробы темно-серые. Методом Шукевича.  Для этого каплю микробной взвеси наносят в конденсат скошенной плотной питательной среды в пробирке. Подвижные микроорганизмы, передвигаясь из конденсата, растут на поверхности среды; неподвижные виды размножаются только в конденсате среды («не заходя» на поверхность агара).

Метод «раздавленная капля». Каплю бактериальной взвеси наносят на обычное предметное стекло, осторожно накрывают покровным стеклом и слегка придавливают пальцем. Микроскопию проводят, так же как и в методе «висячая капля».

Метод посева уколом в полужидкий агар. Для этого бактериологической петлей производят посев исследуемой культуры уколом до дна  пробирки с полужидкой питательной средой. Подвижная культура растет по всей питательной среде, образуя равномерное помутнение, а неподвижная - только по уколу в виде стержня, сохраняя прозрачность незасеянного участка среды.

12. химический состав микробной клетки.

Клетки микроорганизмов на 75—85 % состоят из воды и на 15—25 % из сухого вещества. В состав сухого вещества клетки входят углерод, кислород, азот, водород и минеральные элементы.

Минеральные элементы содержатся в  клетках микроорганизмов в количестве от 3 до 10 %. Самыми важными из них  являются калий, магний, кальций, железо, фосфор и др. Минеральные вещества оказывают влияние на скорость и  направление химических реакций  в клетке.

Углерод, азот, кислород и водород  входят в состав органических веществ клетки. Важнейшая роль в жизни микроорганизмов принадлежит белкам.

Белки. Белки — это сложные  высокомолекулярные вещества, в состав которых входят углерод, водород  и азот, а в некоторые — сера и фосфор.

Все белки по строению делятся на простые (протеины) и сложные (протеиды). К простым белкам относятся альбумины (водорастворимые), глобулины (растворимые  в спирте) и др., в состав их входят только аминокислоты. Простые белки  выполняют роль запасных веществ. Сложные белки состоят из простого белка и добавочной группы небелковой природы. Этой группой могут быть нуклеиновые кислоты, жироподобные вещества и другие соединения.