Шпаргалка по "Микробиологии"

1. предмет и краткая история развития микробиологии и связь с другими науками. Роль отечественных и зарубежных ученых в развитии микробиологии.

Микробиология – наука, изучающая  мельчайшие вещества – микроорганизмы; изучающая биологию, экологию, зоологию, генетику, морфологию, микроорганизмы. Мир микробов велик и многообразен. Микроорганизмы – первые живые существа заселившие землю.

Микроорганизмы – мелкие существа (мкм); играют положительную роль в природе, но есть и вредные живые существа, которые заражают растения и организм человека.

Впервые бактерии и дрожжи увидел А. Левенгук, рассматривавший с помощью  изготовленных им микроскопов зубной налёт, растительные настои, пиво и  т.д. Творцом микробиологии как  науки был Л. Пастер, выяснивший роль микроорганизмов в брожениях (виноделие, пивоварение) и в возникновении  болезней животных и человека.

Микробиология в России С. Н. Виноградским, открывшим хемоавтотрофные микроорганизмы, азотфиксирующие микроорганизмы и  бактерий, разлагающих целлюлозу  в аэробных условиях. Его ученик В. Л. Омелянский открыл анаэробных бактерий, сбраживающих, т. е. разлагающих в  анаэробных условиях целлюлозу, и бактерий, образующих метан. Значительный вклад  в развитие Микробиология был  сделан голландской школой микробиологов, изучавших экологию, физиологию и  биохимию разных групп микроорганизмов (Микробиология Бейеринк, А. Клюйвер, К. ван Нил). В развитии медициской Микробиология важная роль принадлежит Р. Коху, предложившему плотные питательныесреды для выращивания микроорганизмов и открывшему возбудителей туберкулёза и холеры. Развитию медицинской Микробиология и иммунологии способствовали Э. Беринг (Германия), Э. Ру (Франция), С. Китазато (Япония), а в России и СССР — И. И. Мечников, Л. А. Тарасевич, Д. К. Заболотный, Н. Ф. Гамалея.

За время существования микробиологии  сформировались общая, техническая, сельскохозяйственная, ветеринарная, медицинская, санитарная ветви.

• Общая изучает наиболее общие закономерности, свойственные каждой группе перечисленных микроорганизмов: структуру, метаболизм, генетику, экологию и т. д.
• Техническая занимается разработкой биотехнологии синтеза микроорганизмами биологически активных веществ: белков, нуклеиновых кислот, антибиотиков, спиртов, ферментов, а также редких неорганических соединений.
• Сельскохозяйственная исследует роль микроорганизмов в круговороте веществ, использует их для синтеза удобрений, борьбы с вредителями.
• Ветеринарная изучает возбудителей заболеваний животных, методы диагностики, специфической профилактики и этиотропного лечения, направленного на уничтожение возбудителя инфекции в организме больного животного.
• Медицинская микробиология изучает болезнетворные(патогенные) и условно-патогенные для человека микроорганизмы, а также разрабатывает методы микробиологической диагностики, специфической профилактики и этиотропного лечения вызываемых ими инфекционных заболеваний.
• Санитарная микробиология изучает санитарно-микробиологическое состояние объектов окружающей среды, пищевых продуктов и напитков, и разрабатывает санитарно-микробиологические нормативы и методы индикации патогенных микроорганизмов в различных объектах и продуктах.

2. Бактериологическая  лаборатория, ее задачи. Техника  безопасности при работе в  лаборатории.

Бактериологическая лаборатория - это учреждение ветеринарной службы, деятельность которой направлена на ликвидацию заразных болезней  животных, а также охрану населения от болезней общих для животных и человека. По масштабу работы ветеринарные лаборатории бывают: районные, межрайонные (зональные), областные   (краевые) и республиканские. Основная задача бактериологических лабораторий - диагностика болезней сельскохозяйственных животных (включая птиц), пушных зверей, рыб, пчел, а также проведение экспертизы пищевых продуктов и кормов, санитарной оценки воды, воздуха и почвы.

Лабораторию размещают в отдельном  здании, вдали от проезжих дорог. В  ней предусматривают приемное отделение, бактериологический, вирусологический, биохимический, серологический и патологоанатомический  отделы; выделяют специальные помещения  для стерилизации посуды и питательных  сред, для мытья посуды. Для выполнения работы в асептических условиях  оборудуют специальные изолированные  помещения - боксы. Лабораторных животных размещают в виварии. Кроме того, имеются комнаты для специалистов, обслуживающего персонала, кабинет  заведующего, помещения для библиотеки, склада, весовой, раздевалки  и др.

Учебная микробиологическая лаборатория  предназначена для овладения  студентами методами выделения и  изучения различных микроорганизмов. В ней проводятся лабораторные занятия, предусмотренные программой, а также  научно-исследовательская работа.

Правила работы, техника  безопасности и личная профилактика в  лаборатории.

1. В помещение входить только в халате и белой шапочке (косынке).
2. В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, продукты.
3. В помещении лаборатории категорически запрещается есть.
4. Перед началом работы обязательно проверяют наличие и исправность приборов, посуды, горелок и др. О замеченных недостатках, неисправностях сообщают преподавателю или лаборанту.
5. Нельзя зажигать одну горелку от другой.
6. Не касаться металлическими и другими предметами проводов и контактных частей электросети. Не включать без ведома преподавателя или лаборанта любую электроаппаратуру.
7. Материал, используемый для учебных занятий, должен рассматриваться как особо опасный.
8. При распаковке материала, присланного для исследования, необходимо соблюдать осторожность - банки с материалом снаружи обтирают ватой, смоченной дез. раствором и ставят только на подносы или кюветы.
9. При исследовании поступившего материала и работе с бактериологическими культурами придерживаются правил исключающих возможность инфицирования работника.
10. Вскрытие трупов лабораторных животных производят в специальной одежде, на соответственно оборудованном столе с помощью необходимых инструментов, используя для этих целей кювету, залитую воском (или парафином). Инструменты после вскрытия помещают в стакан с дезраствором или обжигают на пламени горелки, на стол класть запрещается.
11. При работе с жидким инфицированным материалом используют резиновые баллоны, соединенные с пипеткой.
12. Жидкости, содержащие патогенных микробов, переливают над сосудом с дезраствором.
13. Если патологический материал попал случайно на стол, его немедленно удаляют тампоном, смоченным дезинфицирующим раствором. При попадании зараженного материала на кожу, конъюнктиву, слизистую ротовой полости принимают экстренные меры к обеззараживанию.
14. По окончании работы использованные культуры микроорганизмов, инструменты и поверхность стола обеззараживают. В конце занятия бактериальные культуры и другой материал студенты сдают преподавателю, а рабочее место приводят в порядок. Перед уходом из  лаборатории необходимо, вымыть руки и обработать их спиртом.

Уборка лабораторного  помещения. Помещение лаборатории ежедневно до работы  убирают влажным способом. Пыль с поверхностей протирают увлажнённой тряпкой смоченной дезинфицирующим раствором. После окончания работы стены, покрытые метлахскими плитками или окрашенные масляной краской, моют горячей водой с мылом или стиральным порошком. Полы моют 3-5% раствором дезинфектанта. Потолки, карнизы, верхняя часть стен, окрашенные клеевой краской, не реже одного раза в неделю очищают от пыли пылесосом.

Подготовка бокса к  работе. Ежедневно перед началом работы полы протирают дезинфицирующим веществом (2%- 5% раствором хлорамина); воздух обеззараживают бактерицидными лампами, установленными на высоте 2-2.5 м от поверхности пола, из расчета одна лампа БУВ-ЗО (1,5—2,5 Вт) на 1м³ помещения. При указанных условиях бокс облучают 2ч. Перед началом работы лампы выключают. Для того чтобы предотвратить заражение бокса, образцы материалов, подлежащие исследованию, вносят в бокс после предварительного тщательного протирания их 3% раствором формалина. Работа в боксе проводится стерильных халатах, защитных масках и тапочках, специально предназначенных для бокса. Воздух в боксе следует регулярно, не менее 2 раз в неделю, проверять на бактериальную контаминацию. Чашки с мясопептонным агаром и средой Сабуро оставляют открытыми на 15 мин. Посев на мясопептонном агаре выдерживают в термостате 48 ч при 37°С, чашки со средой Сабуро — 96 ч при 22°С. Допустимым ростом считается 5 колоний на чашках. Количество колоний больше 5 при 15-минутной экспозиции является показателем высокой контаминации воздуха бокса. В этих случаях помещение бокса нуждается в дополнительной, более тщательной обработке. Не менее одного раза в неделю помещение бокса моют горячей водой с мылом, дезинфицирующими средствами и протирают досуха.

Уборка рабочего места. По окончании работы берут пинцетом кусок ваты, смачивают его в 5% растворе хлорамина или формалина и протирают им поверхность стола на рабочем месте. 

3. бактериологические  окраски. Приготовление препаратов. Простой метод окраски Формы  иммунного ответа.

Приготовление мазков. Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности предметного хорошо обезжиренного стекла.

Мазки готовят из культур микробов, патологического материала (мокрота, гной, моча, кровь и др.) и из органов трупов. Приготовление препарата для микроскопии складывается из следующих этапов:

1.Приготовление мазка на обезжиренном  предметном стекле. 2.Высушивание  препарата. 3.Фиксация мазка.

4. Окраска мазка.

В правильно  приготовленном  препарате  микробные  клетки должны быть расположены  в один слой.

Техника приготовления мазков определяется характером исследуемого материала.

1. Приготовление мазков из микробных  культур с жидкой питательной  среды и из жидкого патологического материала (моча и др.). Маленькую каплю исследуемой жидкости наносят бактериальной петлей на предметное стекло и круговыми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка диаметром в копеечную монету.

2. Приготовление мазков из крови.  На предметное стекло, ближе к одному из его концов, наносят каплю крови. Второе - шлифованное - стекло,  которое должно быть уже предметного, ставят на первое под углом 45° и подводят к капле крови до соприкосновения с ней. После того как кровь растечется по шлифованному краю, стеклом делают скользящее движение справа налево, равномерно распределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла. Толщина мазка зависит от величины угла между стеклами: чем острее угол, тем тоньше мазок. Правильно приготовленный мазок имеет светло-розовую окраску и одинаковую толщину на всем протяжении.

3. Приготовление толстой капли.  На середину предметного стекла  пастеровской пипеткой наносят  каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к капле крови, выступающей из пальца. Нанесенную на стекло кровь размазывают бактериальной петлей так, чтобы диаметр образующегося мазка соответствовал величине копеечной монеты. Стекло оставляют в горизонтальном положении до подсыхания крови. Кровь в “толстой капле” распределяется не равномерно, образуя неровный край.

4. Приготовление мазка из вязкого  материала (мокрота, гной). Мокроту или гной, нанесенные на предметное стекло ближе к узкому краю, накрывают другим предметным стеклом. Стекла слегка придавливают друг другу. После этого свободные концы стекол захватывают 1 и 2 пальцами обеих рук и разводят в противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к другу. Получаются мазки с равномерно распределённым материалом, занимающим большую часть.

5. Приготовление мазка из культур  с плотных питательных сред. На  середину чистого, хорошо обезжиренного  стекла наносят каплю водопроводной  воды, в нее вносят бактериальную  петлю с небольшим количеством  исследуемой микробной культуры  так, чтобы капля жидкости стала слегка мутноватой. После этого излишек микробного материала на петле сжигают в пламени горелки и приступают к приготовлению мазка по описанному выше способу.

6. Приготовление мазков из органов  и тканей. Поверхность органа  с целью обеззараживания прижигают  накаленными браншами пинцета,  делают по этому месту надрез и из глубины остроконечными ножницами вырезают небольшой кусочек ткани, который помещают между двумя предметными стеклами. Далее поступают так же, как при приготовлении мазка из гноя и мокроты. Если ткань органа плотная, то из глубины разреза делают скальпелем соскоб. Полученный при соскабливании материал распределяют тонким слоем по поверхности стекла скальпелем пли бактериальной петлей. Для изучения взаимного расположения элементов ткани и находящихся в ней микроорганизмов делают мазки-отпечатки. Для этого вырезанный из середины органа небольшой кусочек ткани захватывают пинцетом и прикладывают поверхностью среза к предметному стеклу несколько раз последовательно, получая, таким образом, ряд мазков-отпечатков.

Высушивание и фиксирование мазков. Приготовленный на предметном стекле мазок высушивают и после высыхания фиксируют. При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые. Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение средств, вызывающих коагуляцию белков

Физический способ фиксации. Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или 1 и II пальцами правой руки за ребра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с. Надежность фиксации проверяют следующим простым приемом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога.

Химический способ фиксации. Для фиксации мазков применяют химические вещества такие как: Безводный метиловый спирт. Этиловый (винный) спирт 96%. Жидкость Никифорова (смесь спирта и наркозного эфира в соотношении 1:1). Жидкость Карнуа (спирта 96% 60 мл, хлороформа 30 мл, уксусной кислоты ледяной 10 мл).

Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с  фиксирующим веществом и затем  высушивают на воздухе.

Техника окраски мазков. Для окраски мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, что предложено А. И. Синевым. Простота приготовления, удобство применения, а также возможность хранения красящих бумаг в течение долгого времени явились основанием для широкого их использования при различных способах окраски. Окраска мазков красящей бумагой. На высушенный и фиксированный препарат наносят несколько капель воды, кладут окрашенные бумажки величиной 2х2 см. В течение всего времени прокрашивания бумага должна оставаться влажной и плотно прилегать к поверхности стекла. При подсыхании бумагу дополнительно смачивают водой. Продолжительность окрашивания мазка определяется методом окраски. По окончании окраски бумагу осторожно снимают пинцетом, а мазок промывают водопроводной водой и подсушивают на воздухе или фильтровальной бумагой.

Окраска мазков растворами красителей. На высушенный и фиксированный препарат пипеткой наносят краситель в таком количестве, чтобы он покрывал весь мазок. При окраске мазков концентрированными растворами красителей (карболовый фуксин Циля, карболовый генциановый или кристаллический фиолетовый) окрашивание производят через фильтровальную бумагу, задерживающую частицы красителя: на фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают раствор красителя.