Методы определения витамина С (аскорбиновой кислоты) в сырье и пищевых продуктах

 При каждом анализе  проводят не менее двух параллельных  определений (с двумя навесками), причем повторные титрационные числа в каждом определении не должны разниться между собой более чем на 0,03см3; из них берут среднее арифметическое. Титрование должно продолжаться не более 2 мин; и количество соответствующего раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола или иодноватокислого калия, пошедшее на одно титрование, должно быть в пределах 1-2 см3.

 Результаты параллельных  определений (из двух навесок) не  должны отличаться друг от  друга более чем на ± 5%.

 

Описание методов.

 

Арбитражный метод (с применением сероводорода).

1. Навеску жидких продуктов и продуктов густой консистенции разводят 5%-ным раствором уксусной кислоты до определенного объема (в мерной колбе вместимостью 50-100 см3); получают так называемый первоначальный раствор.

Первоначальные растворы для настоев хвои, жидкой части первых блюд, соков и прочих продуктов с невысоким (не выше 20 мг, %) содержанием витамина С получают путем разведения без применения мерных колб. В этом случае в зависимости от содержания витамина С уксусную кислоту берут к массе навески в отношении 1:1 или больше; 10 см3 первоначального раствора вносят пипеткой в коническую колбу или в центрифужный стакан вместимостью 60-80 см3 и прибавляют 0,4 г х.ч. углекислого кальция, слегка встряхивая. Затем приливают пипеткой 5 см3  5%-ного раствора уксуснокислого свинца, взбалтывают и тотчас центрифугируют в течение 1-2 мин или фильтруют через складчатый фильтр.

В случае анализа слабых витаминоносителей употребляют большее количество анализируемой жидкости и берут 20 см3 первоначального раствора (вместо 10 см3), пропорционально увеличивая количество углекислого кальция и раствора уксуснокислого свинца.

2. Навеску твердых продуктов тщательно растирают, применяя, в случае надобности, 5-10 г стеклянного порошка, и приливают постепенно 5%-ный раствор уксусной кислоты в кратном к навеске отношении (не менее 3 см3  на 1 г навески). При использовании, в ходе анализа мерной посуды стеклянный порошок не употребляют.

После растирания смесь оставляют в ступке настаиваться в течение 10 мин.

После настаивания таких продуктов, как драже, таблетки или порошок шиповника содержимое ступки количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50-100 см3  и отмеренную для настаивания кислоту расходуют неполностью - часть кислоты оставляют для промывки ступки и пестика и доведения жидкости в колбе до метки. Допускается непосредственный перенос навесок хорошо растворяющихся драже и таблеток в мерную колбу для растворения в ней и настаивания.

Перед переносом в центрифужные стаканы содержимое колбы перемешивают путем переворачивания.

При экстракции прочих твердых продуктов 5%-ный раствор уксусной кислоты наливают в ступку строго по расчету выбранной кратности к навеске; по окончании настаивания жидкость из ступки вместе с нерастворившейся частью разливают по центрифужным стаканам.

Содержимое центрифужных стаканов центрифугируют до просветления.

При отсутствии центрифуги центрифугирование заменяют фильтрованием через гигроскопическую вату или сложенную в несколько слоев марлю.

При применении контрольных методов стеклянный порошок, в случае его отсутствия, может быть заменен кварцевым песком.

3. После центрифугирования жидкость из центрифужных стаканов сливают в один сосуд, перемешивают и получают так называемый первоначальный экстракт.

При применении фильтрования содержимое ступки после настаивания тщательно перемешивают и отфильтровывают не всю жидкость, а только некоторую часть ее, в таком количестве, чтобы в случае надобности возможно было многократное повторение анализа первоначального экстракта.

Из первоначального экстракта берут 10 см3  и обрабатывают углекислым кальцием и раствором уксуснокислого свинца для растворов, получающихся разведением жидких продуктов.

4. После того как первоначальный раствор или экстракт обработан углекислым кальцием и раствором уксуснокислого свинца, а затем отцентрифугирован или отфильтрован от образовавшегося осадка, через раствор или экстракт пропускают в течение 5 мин быстрый ток сероводорода.

Для более быстрого образования осадка сернистого свинца раствор или экстракт тотчас же после начала пропускания сероводорода энергично взбалтывают. Выпавший осадок отфильтровывают и через фильтрат пропускают для удаления сероводорода ток углекислоты, предварительно пропущенный через дистиллированную воду, налитую в склянку Тищенко.

Полноту удаления сероводорода из раствора или экстракта контролируют фильтровальной бумагой, смоченной насыщенным раствором уксуснокислого свинца, путем сравнения с фильтровальной бумагой, смоченной простой водой.

После удаления сероводорода производят титрование жидкости.

 Работу с сероводородом  необходимо производить в вытяжном шкафу через небольшие форточки, сделанные в дверцах шкафа. Для поглощения отработанного сероводорода употребляют 10%-ный раствор щелочи.

5. 1-10 см3 жидкости (в зависимости от содержания витамина С) вносят пипеткой в коническую колбу, куда заранее прилит 1 см3 2%-ного раствора соляной кислоты, добавляют туда же воду до объема 15 см3  и титруют из микробюретки раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, слегка взбалтывая, до появления розового окрашивания, удерживающегося 0,5-1 мин. В случае титрования слабого витаминоносителя раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола приливают из микробюретки по каплям; при титровании сильного витаминоносителя вначале приливают по нескольку капель раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола сразу. По окончании титрования после записи отсчета по бюретке дополнительно приливают две контрольные капли раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, и если они дадут интенсивное розовое окрашивание, то это указывает, что конец титрования определен правильно.

 При отсутствии микробюретки  допускается применение при титровании градуированной через 0,01 см3 пипетки.

6. Если при первом титровании пойдет раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола больше, то надо раствор, из которого отбирают 10 см3 для обработки углекислым кальцием и уксуснокислым свинцом, развести раствором 5%-ной уксусной кислоты вдвое или более, сколько требуется по первому титрованию. Это вторичное разведение принимают во внимание при конечном подсчете результатов путем введения в числитель формулы дополнительного множителя 2 или более, в зависимости от фактического разведения.
7. Для каждого анализа делают поправку на реактивы (контрольный опыт). В коническую колбу наливают 1 см3  2%-ной соляной кислоты и такое количество воды, чтобы получился объем, который был при титровании исследуемого объекта; затем прибавляют из микробюретки по каплям раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола до первого появления розовой окраски. Количество израсходованного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола в миллилитрах является поправкой на реактивы. Поправка обычно составляет для титруемого объема (15 см3) 0,04-0,06 см3  и вычитается из объема раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, используемого на титрование экстракта. При увеличении титруемого объема до 20-30 см3 производят соответствующее определение поправки.
8. При анализе готовых блюд применяют следующие приемы. Уксуснокислые экстракты картофельных изделий, дающих при анализе мельчайшие взвеси, и экстракты супов-пюре подвергают для получения первоначальных экстрактов центрифугированию в течение не менее 15 мин. Если при обработке сероводородом готовых блюд осадок сернистого свинца проходит через фильтр, допускается разводить первоначальный экстракт вдвое, втрое и более 5%-ной уксусной кислотой и брать для анализа соответственно большее количество разбавленного экстракта (вместо 10 мл), а также пропорционально большее количество углекислого кальция и уксуснокислого свинца с последующим применением для титрования больших количеств жидкости.
9. При анализе сушеных сульфитированных продуктов (картофеля и пр.) навеску переносят в ступку, куда помещают стеклянный порошок в количестве не свыше 10 г. После тщательного растирания в ступке с раствором уксусной кислоты, взятой не менее чем в 10-кратном количестве к навеске, и настаивания экстракт центрифугируют (10 или более минут) или фильтруют. Из центрифугатов или фильтратов, обычно очень мутных, берут по 20 см3, прибавляют последовательно 1,6 г х.ч. углекислого кальция и 20 см3  5%-ного раствора уксуснокислого свинца. После центрифугирования в течение 1-2 мин или фильтрования центрифугат или фильтрат обрабатывают сероводородом. Далее поступают, как указано в пункте 5.
10. Содержание аскорбиновой кислоты (витамина С) (X), мг%, вычисляют по формуле

 

                           ,

 

где - количество рабочего раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, 
                     используемое на титрование, за вычетом поправки на реактивы,  
                      ;

F - поправка на титр раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола для 
                  перевода на точно 0,001 н раствор;

- объем, до которого доведена  навеска при прибавлении к  ней  
                    экстрагирующей жидкости, см3 ;

- объем анализируемой жидкости, взятой для титрования, см3 ;

m - навеска, г или объем ;

- объем первоначального раствора  или первоначального экстракта 
                   (10 см3), взятый для анализа после прибавления к нему 5%-ного  
                   раствора уксуснокислого свинца;

- объем (10 см3) первоначального раствора или первоначального                        
                    экстракта, взятый для анализа, перед его обработкой 5%-ным  
                    раствором уксуснокислого свинца;

0,088 - количество аскорбиновой  кислоты, соответствующее 1 см3 точно 0,001 н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, мг.

При применении в ходе анализа вторичного разведения первоначального раствора или первоначального экстракта в числителе проставляют множитель в соответствии с пунктом 6.

 

Модификация арбитражного метода (без применения сероводорода).

 

11. Начальную стадию анализа исследуемого объекта производят так, как это изложено в пунктах 1,2 и 3.

После того как первоначальный раствор или экстракт обработай углекислым кальцием и раствором уксуснокислого свинца и затем отцентрифугирован или отфильтрован от образовавшегося осадка, следует проводить титрование жидкости по способу, изложенному в пункте 5 настоящего стандарта.

12. В случае анализа окрашенных объектов, когда в результате обработки 5%-ным раствором уксуснокислого свинца согласно пунктах 1,2 и 3 не получаются достаточно обесцвеченные центрифугаты или фильтраты, применяют последовательно один из следующих приемов:

- увеличивают объем титруемой жидкости до 30 см3 вместо 15 см3  путем добавления воды;

- увеличивают количество уксуснокислого свинца вдвое, втрое или даже вчетверо (10; 15; 20 см3 ) и соответственно увеличивают количество углекислого кальция, т.е. берут 0,8; 1,2; 1,6 г с последующим пропусканием через центрифугат или фильтрат сероводорода (, если обесцвечивание при данных условиях не было достигнуто.

13. Вычисление результатов анализа производят по формуле, приведенной в пункте 10.

 

Упрощенный метод

 

14. Первоначальные растворы и первоначальные экстракты готовят согласно пункта 1,2 и 3 с заменой уксусной кислоты раствором 2%-ной соляной кислоты или в случае анализа плодов шиповника и молока - дистиллированной водой. Из таких растворов или экстрактов отбирают пипеткой 1 - 10 см3 (в зависимости от содержания витамина С), вносят в коническую колбу вместимостью 50-100 см3 , куда заранее налито столько воды, чтобы общий объем жидкости равнялся 15 см3, и титруют 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, согласно п. 14д настоящего стандарта, без предварительной обработки углекислым кальцием и уксуснокислым свинцом.

При анализе нерезко окрашенных продуктов титрование проводят в объеме не 15, а 30 см3, изменяя количество добавляемой воды. В этом случае титруют, сравнивая окраску титруемой жидкости с экстрактом, приготовленным для титрования.

15. При анализе сухих плодов шиповника навеску измельченных плодов количественно переносят в ступку с заранее внесенным туда стеклянным порошком (около 5 г), осторожно, тщательно и возможно мельче растирают, подливая небольшими порциями 300  см3 дистиллированной воды комнатной температуры, и настаивают 10 мин. Из полученной взвеси после тщательного размешивания центрифугируют или фильтруют некоторую часть через слой ваты, вложенный в воронку.

В зависимости от содержания витамина С, руководствуясь первым титрованием, отбирают пипеткой от 1 до 5 см3 центрифугата или фильтрата и переносят в колбу вместимостью 50-100 см3, куда заранее прилит 1 см3 раствора 2%-ной соляной кислоты, затем прибавляют столько воды, чтобы общий объем жидкости в колбе был 15 см3, и титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола.

В случае окрашенности центрифугата или фильтрата, мешающей уловить появление розового окрашивания, а также при высоком содержании витамина С центрифугаты или фильтраты разводят перед титрованием водой вдвое или более.

 В случае анализа незрелых плодов шиповника вместо воды для экстракции применяют 2%-ную соляную кислот).

 При анализе плодов  шиповника контрольными методами  употребляют не 300  см3 воды, а вдвое меньше.

16. При анализе молока 5 см3 молока разводят в 3 раза дистиллированной водой (1:2). При разведении молоко отмеривают пипеткой, а дистиллированную воду наливают из бюретки вместимостью 25-50 см3 . 5 см3 полученного раствора вносят пипеткой в коническую колбу вместимостью 25-50 см3, куда заранее наливают 1 см3 2%-ной соляной кислоты и дистиллированной воды до общего объема в 15 см3; затем, осторожно взбалтывая, содержимое колбы титруют из микробюретки 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, приливая последний каплями до появления слаборозового окрашивания, удерживающегося 0,5-1 мин. Для повторного титрования отбирают пробу из той же порции разведенного молока.