Методы определения витамина С (аскорбиновой кислоты) в сырье и пищевых продуктах

 

Подготовка исследуемого объекта.

Навески:

Порошок и концентраты шиповника, концентраты из хвой	1 - 2 г
Сироп из плодов шиповника	5 г
Чай витаминизированный плиточный	2 - 5 г
Витаминизированные конфеты и чай (кирпичный)	10 - 50 г
Настои (хвои, шиповника)	10 - 20
Соки и экстракты	1 - 50
Плоды шиповника очищенные, пюре шиповника с сахаром, хвоя	5 г
Плоды шиповника целые, картофель сушеный, картофель сушеный сульфитированный и другие сушеные сульфитированные продуты	10 г
Консервы	5 - 50 г
Свежие растительные продукты (фрукты, плоды, ягоды, овощи к зелень)	10-50 г
Блюда готовые:
твердая часть первого блюда и второе блюдо	20-50 г
жидкая часть первого блюда	20-50
Молоко	5

 

Примечания:

1. Для арбитражного анализа  навески очищенных плодов шиповника  берут из хорошо измельченной  средней пробы (100 г) в количестве 10 г, в целых плодах - 20 г.

2. Те или иные величины  навесок различных продуктов  берутся в зависимости от большего или меньшего содержания в них витамина С.

3. Взвешивание навесок  производят с точностью до 0,01 г, кроме навесок готовых блюд, которые взвешивают с точностью до 1 г.

 

 

 

 

 Применяемые реактивы, приготовление их и установка  титров.

Кислота уксусная; 80%-ный раствор; 5%-й раствор (58 см3 80%-ной уксусной кислоты доводят дистиллированной водой до 1 дм3).

Свинец уксуснокислый; насыщенный раствор; 5%-ный раствор на 5%-ной уксусной кислоте (недостаточно чистая соль свинца должна быть трижды перекристаллизована).

Кислота серная ч.; раствор 1:2 (по объему); раствор 1:4 (по объему); 0,02 н раствор (0,56 см3 серной кислоты х.ч. плотностью 1,84 доводят дистиллированной водой до 1 дм3).

Кислота соляная ч.; раствор 1:1 (по объему); 2%-ный раствор (45,1 см3 соляной кислоты плотностью 1,19 доводят дистиллированной водой до 1 дм3).

Кислота соляная техническая; раствор 1:1 (по объему).

Кальций углекислый.

Железо сернистое ч.д.а.

Аммоний щавелевокислый х.ч.; насыщенный раствор; 0,01 н раствор (0,062 г щавелевокислого аммония растворяют в воде и объем доводят до 100 дважды перегнанной водой).

Натрий щавелевокислый х.ч.; насыщенный раствор; 0,01 н раствор (0,067 г щавелевокислого натрия растворяют в воде и объем доводят до 100 дважды перегнанной водой).

Натрий серноватистокислый (гипосульфит); 0,1 н раствор; 0,01 н раствор. Для приготовления 0,1 н раствора навеску 24,82 г растворяют в свежепрокипяченной дистиллированной воде и доводят объем до 1 дм3. Титр раствора серноватистокислого натрия устанавливают по 0,1 н раствору марганцевокислого калия, который проверяют по точной навеске щавелевокислого аммония или щавелевокислого натрия по общим правилам объемного анализа.

Калий марганцевокислый; 0,1 н раствор; 0,01 н раствор (для приготовления 0,1 н раствора навеску 3,158 г растворяют в дистиллированной воде и объем доводят до 1дм3).

Калий иодистый; 1%-ный раствор.

Соль натриевая 2,6-дихлорфенолиндофенола; 0,001 н раствор (в тексте настоящего стандарта обозначается далее как 2,6-дихлорфенолиндофенол).

Двойная сернокислая соль закиси железа и аммония  
FeSO4(NH4)2SO4 ×6H2O (соль Мора); 0,01 н раствор. Для получения 0,01 н раствора соли Мора навеску 3,92 г соли растворяют в 1 дм3 0,02 и раствора серной кислоты. Раствор соли Мора должен храниться в склянке из темного стекла, и титр его должен проверяться каждые 3-4 недели. Установку титра соли Мора ведут по титрованному 0,01 н раствору марганцевокислого калия по общим правилам объемного анализа.

Кали едкое х.ч.; 10%-ный раствор.

Натр едкий х.ч.; 10%-ный раствор.

Калий иодноватокислый; 0,001 н раствор.

Крахмал, 1%-ный и 0,5%-ный растворы.

Мрамор в кусках или углекислый газ в баллоне.

Буферная смесь (однозамещенный фосфат калия и двузамещенный фосфат натрия с pH около 7).

Стеклянный порошок, приготовленный из чистого, не зеленого, лабораторного стекла.

Все применяемые реактивы должны соответствовать требованиям действующих стандартов или технических условий.

Для приготовления растворов, а также для проведения анализов применяют дистиллированную воду, перегнанную в аппаратуре из стекла. Для приготовления точных растворов щавелевокислого аммония или щавелевокислого натрия применяют дважды перегнанную воду; при ее получении в перегонную колбу вносят 0,1 г марганцевокислого калия и несколько капель серной кислоты х.ч. плотностью 1,84 на 1 дм3 воды.

Приготовление 0,001 н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола: 0,2 г 2,6-дихлорфенолиндофенола растворяют в 600 см3 воды при энергичном взбалтывании (допускается применение буферной смеси), Раствор фильтруют и доводят водой до 1 дм3. Срок годности раствора не более 7 дней при условии хранения в темном месте. Титр раствора проверяют ежедневно.

Установка титра раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола производится по одному из следующих методов:

а) По соли Мора. В коническую колбу наливают 10 см3  раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, а в микробюретку 0,01 н раствора соли Мора; к раствору 2,6-дихлорфенолиндофенола прибавляют 5 см3 насыщенного раствора щавелевокислого аммония или щавелевокислого натрия и титруют, пока синяя окраска раствора не сменится соломенно-желтой (нерезкая перемена окраски указывает на порчу реактива).

Титр раствора соли Мора устанавливают, как указано выше.

Поправку (F) на титр раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола вычисляют по формуле

 

                                            ,

 

где - количество соли Мора, используемое на титрование 10 см3       
                   данного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, в см3 ;

- количество раствора марганцевокислого калия, используемое 
                  на титрование 10 см3  соли Мора, см3 ;

- количество раствора марганцевокислого калия, используемое 
                   на титрование 10 см3 точно 0,01 н раствора щавелевокислого аммония или щавелевокислого натрия, см3.

1 точно 0,001 н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты.

б) По иодату. Несколько кристаллов аскорбиновой кислоты растворяют в 50 см3 2%-ной х.ч. серной кислоты.

Из полученного раствора отбирают одной и той же пипеткой 5 см3 для титрования рабочим (приблизительно 0,001 н) раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола и 5 см3 для титрования точно 0,001 н раствором KJO3.

Титрование раствором KJO3 ведется в присутствии нескольких кристаллов (1-2 мг) KJ и двух - трех капель 1%-ного раствора крахмала до появления голубого окрашивания; титрование раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола производят до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 3 мин.

Титрование удобно производить в фарфоровой чашке.

 

Расчет титра раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола (X) по аскорбиновой кислоте производят по следующей формуле, исходя из того, что 1 см3 0,001 н иода, а, следовательно, и иодата, эквивалентен 0,088 мг аскорбиновой кислоты.

 

                                           ,

 

где   V1 - количество 0,001 н раствора KJO3 , используемое на титрование, 
                см3;

- количество раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, используемое на титрование, см3.

 

Таким образом узнают, какому количеству аскорбиновой кислоты в миллиграммах соответствует 1 см3 раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола.

Приготовление 0,1 н раствора иодноватокислого калия. Растворяют точно отвешенные 3,567 г х.ч. иодноватокислого калия в воде, доводят объем до 1 см3 и получают 0,1 н раствор, из которого по мере надобности путем разведения в 100 раз получают 0,001 н раствор. При отсутствии х.ч. иодноватокислого калия применяют перекристаллизованный и высушенный при 105°С до постоянного веса реактив.

Приготовление 0,1 н раствора иода. 12,692 г свежевозогнанного иода растворяют в 20 см3 водного раствора иодистого калия, содержащего 20 г KJ в указанном объеме. После полного растворения иода раствор переводят в мерную колбу вместимостью 1 см3  и содержимое колбы доводят водой до метки. Из 0,1 н раствора по мере надобности путем разведения в 10 раз получают 0,01 н раствор, титр которого устанавливают по общим правилам объемного анализа.

Приготовление раствора крахмала, 0,5 г растворимого крахмала, взвешенного с точностью до 0,01 г, растирают в ступке с 5 см3 воды до получения однородной кашицы; смесь медленно вливают при постоянном размешивании в 100 кипящей воды и кипятят 2-3 мин до получения прозрачной или слабо опалесцирующей жидкости. Раствор должен храниться на холоде не более 2-3 дней.

Приготовление буферной смеси. 11,876 г Na2HPO4×2H2O  растворяют в литре дистиллированной воды, получают раствор I; 9,078 г KH2PO4  растворяют также в 1 lv3 дистиллированной воды - раствор II. Смешивают 7 частей раствора I и 3 части раствора II; pH раствора соответствует 7.

Получение сероводорода. Вместо аппарата Киппа для получения сероводорода возможно применять следующую упрощенную установку. Берут небольшую банку вместимостью до 250 см3  с широким горлом, в которое вставляют пробку. На дно банки кладут сернистое железо слоем в 2-3 см. В пробке делают два отверстия; одно для небольшой делительной воронки, куда наливают техническую соляную кислоту (крепкая кислота разводится 1:1), другое - для отводной стеклянной трубки, согнутой под углом. Эта трубка соединяется с маленькой колбой или предохранительной склянкой (играющими роль клапана) с водой, которые, в свою очередь, соединены с сосудом, содержащим анализируемый экстракт. Выделяющийся сероводород отводят в склянку (коническую колбу) с 5-10% едкой щелочью, где он и поглощается. Чтобы избежать лишней траты соляной кислоты, в промежутке между анализами соляную кислоту сливают с сернистого железа в специальную склянку с притертой пробкой и сернистое железо заливают водой.

Очистка кварцевого песка. Песок просеивают через сито с диаметром отверстий 4-5 мм и отмучивают водопроводной водой. Затем приливают к песку соляную кислоту (крепкая кислота разводится вдвое), перемешивают и оставляют стоять на ночь. Далее песок тщательно промывают водопроводной и дистиллированной водой до исчезновения реакции на хлор (проба с раствором азотнокислого серебра) и высушивают. Песок вновь просеивают через сито с диаметром отверстий 1-1,5 мм и прокаливают для удаления органических веществ. Очищенный песок должен быть проверен на отсутствие следов железа (проба с 5%-ной соляной кислотой и роданидом с учетом результатов параллельной контрольной пробы на содержание железа в соляной кислоте).

Очищенный песок хранят в чистой и плотно закрытой стеклянной банке.

Примечания:

1. Препараты: 40%-ный раствор  глюкозы с 5%-ной аскорбиновой  кислотой в ампулах и 40%-ный раствор глюкозы с 0,2%-ной аскорбиновой кислотой в ампулах - анализируются с применением раствора I2 (в соответствии с техническими условиями).

2. Не допускается анализировать  свежие растительные продукты  упрощенным методом, если продукты содержат большое количество дубильных веществ.

3. Для свежеотжатых томатного, мандаринового и апельсинового соков допускается применение упрощенного метода.

 Предварительную подготовку  и анализ не вошедших в таблицу  продуктов производят по навеске и методу, принятому для соответствующего по характеру объекта, включенного в таблицу 1.

 Сероводород применяют:

- когда имеется основание предполагать наличие в исследуемом материале обратимо окисленной формы витамина С - дегидроаскорбиновой кислоты (в свежих растительных продуктах, а также в продуктах, подвергшихся термической обработке и хранению);

- для освобождения экстракта от пигментов, не устраняемых действием уксуснокислого свинца;

-для устранения мутности в экстрактах (при анализе сульфитированного картофеля, некоторых крахмалистых изделий и т.п.), если определение без применения сероводорода невозможно.

 Упрощенный и иодатный методы применяют для всех продуктов, за исключением сушеных (кроме шиповника), сульфитированных, интенсивно окрашенных или содержащих дегидроаскорбиновую кислоту в количестве 10% и более, кроме того, иодатный метод не применяется при анализе готовых блюд и молока.

Наличие дегидроаскорбиновой кислоты определяют сравнением результатов, полученных при параллельном анализе данного продукта арбитражным методом (с H2S) и его модификацией (без H2S).