Экпертиза рыбы и рыбных продуктов

Чистую культуру после макро- и микроскопической проверки изучают. Для этого исследуют ее морфологические, тинкториальные, культуральные, биохимические, серологические и биохимические свойства по схеме:

1) морфология (микроскопия окрашенных  микробов);

2) подвижность (микроскопия микробов  в живом состоянии методом  висячей или раздавленной капли);

3) форма и расположение жгутиков (окраска препаратов);

4) отношение к окраске по Граму (грамположительные или грамотрицательные);

5) реакция на цитохромоксидазу (цв. табл. I,А);

6) споры (окраска препарата);

7) капсулы (окраска препарата);

8) бульон (прозрачность или мутность, пленка, осадок, цвет среды, запах);

9) скошенный агар (мощность роста - отсутствует, слабая, умеренная; характер роста - нитевидный, волнистый, мелкозубчатый, лопастной, ворсистый; блеск - влажный, жирный, тусклый; поверхность - гладкая, шероховатая, зернистая, складчатая, сухая, влажная; рельеф - плоский, выпуклый; прозрачность - непросвечивающийся, просвечивающийся, опалесцирующий; консистенция - маслянистая, тягучая, крошковатая; цвет посевной черты - пигментация; окраска среды - зеленая, сине-зеленая и т. д.);

10) колонии на агаре в бактериологических  чашках (рост - скудный умеренный, обильный; величина - крупные, мелкие, точечные; форма - круглая, эллипсовидная, корневидная; структура - волокнистая, хлопьевидная; характер края - волнистый, ровный, изрезанный, бахромчатый, локонообразный и т. д.; цвет колонии - пигментация; окраска среды; запах - отсутствует, резкий, что напоминает);

11) желатина в бактериологических  чашках (разжижена или нет; характер  разжижения; дальнейшее описание  морфологии колонии ведут как  на агаре);

12) желатина, посев уколом (характер  роста по уколу - в виде ленты, нити, гвоздя с головкой, равномерный, прерывистый, только поверхностный; разжижение - в виде чашечки, воронки, цилиндра, кратера, поверхностное, пузырчатое - в глубине; скорость разжижения - быстро, медленно; окраска среды - зеленая, синяя и т. д.);

13) лакмусовое молоко (реакция - кислая, щелочная, без изменений; ввертывание; сгущение; пептонизация);

14) картофель (интенсивность и характер  роста, цвет пигмента);

15) ферментация углеводов (быстрота  и степень кислото- и газообразования  при росте на средах Гасса  и Хью-Лейфсона);

16) образование ацетилметилкарбинола (к 1 мл 2-3-суточной культуры на  среде Кларка прибавляют 0,5 мл 6 %-ного  спиртового раствора альфанафтола  и 1 мл 16 %-ного водного раствора NaOH. При положительной реакции через 3-5 мин среда приобретает вишневый  цвет);

17) образование индола (экстрагирование  индола путем прибавления 1-2 мл  эфира к 3-5 мл 3-5-суточной культуры  на мясо-пептонном бульоне или  бульоне Хоттингера, затем прибавляют реактив Эрлиха-Боме, который в присутствии индола окрашивает вытяжку эфира в красный цвет);

18) образование сероводорода (фильтровальная  бумага, смоченная раствором уксуснокислого  свинца и фиксированная в пробирке  с мясо-пептонным бульоном, сразу же после засева в присутствии сероводорода чернеет или буреет);

19) образование аммиака (фильтровальная  бумага, заранее обработанная реактивом Несслера или Крупа и фиксированная в пробирке с только что засеянной средой, обычно уже через сутки инкубирования посевов в присутствии аммиака буреет или краснеет);

20) редукция нитратов (при редукции  нитратов в нитриты получается  темно-синее окрашивание 2-3-суточной  бульонной культуры с 0,2 % калийной  селитры в результате прибавления к культуре 10 %-ного водного раствора крахмала с йодистым калием и 10 %-ного водного раствора химически чистой серной кислоты);

21) гидролиз крахмала (на поверхность 0,2 %-ного крахмального агара в  бактериологических чашках с 2-3-суточной культурой наливают насыщенный и профильтрованный раствор кристаллического йода в 50 %-ном спирте; при рассмотрении чашки в проходящем свете вокруг колоний бактерий расщепляющих крахмал, можно обнаружить светлые зоны);

22) редуцирующая способность (посев  уколом в агар с метиленовой  синькой и другими красками);

23) отношение к кислороду (выдерживают  посевы в аэробных и анаэробных  условиях);

24) гемолизируюшие свойства (посев  на мясо-пептонный агар с 5-10 % дефибринированной крови барана, кролика или лошади);

25) температурный оптимум (определяют  быстроту и интенсивность роста  микробов, выдерживая посевы при  различной температуре).

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяют методом диффузии в агар с применением стандартных бумажных дисков на плотных питательных средах (МПА и кровяном агаре). Стандартные диски диаметром 5 мм готовят на специальной фильтровальной бумаге, пропитанной антибиотиками и окрашенной в контрастные цвета (цв. табл. I-Б).

В стеклянные чашки Петри наливают 2 % МПА или кровяной агар толщиной 4-5 мм. Чашки слегка подсушивают в термостате. В зависимости от интенсивности роста исследуемой культуры ее используют после 1 - 3-суточного инкубирования при оптимальной температуре на МПА или МПБ. Из агаровых культур с помощью физиологического раствора готовят 10-6 бактериальную взвесь.

На поверхность подсушенной среды наносят несколько миллилитров исследуемой культуры, равномерно распределяют по поверхности среды, избыток культуры отсасывают пастеровской пипеткой. Через 30-40 мин на поверхность среды стерильным остроконечным пинцетом накладывают диски с антибиотиками, слегка придавливая к агару. Диски располагают на расстоянии 2-2,5 см один от другого и от края чашки. Чашки переворачивают вверх дном и помещают в термостат на 1-2 сут при температуре инкубирования, оптимальной для данного микроба.

Диффундируя в агар, антибиотик образует вокруг диска зону угнетения роста чувствительных к нему бактерий. Зоны угнетения измеряют полоской миллиметровой бумаги.

 

IV Ветеринарно–санитарная оценка и мероприятия бактериальных болезнях рыб

В рыбоводных хозяйствах независимо от их санитарно-эпизоотического состояния проводится комплекс профилактических и ветеринарно-санитарных мероприятий, которые включены в общий технологический рыбоводный процесс . Он включает три основных направления работ: создание оптимальных зоогигиенических условий выращивания рыб; предупреждение заноса и распространения заразных болезней; мероприятия по профилактике незаразных болезней и токсикозов рыб. С учетом вышесказанного мы при подготовке разделов по биологии рыб и основам рыбоводства изложили основные требования и правила по созданию оптимальных зоогигиенических условий среды обитания , соблюдению биотехнологии выращивания рыб , кормлению рыб, удобрению и мелиорации прудов ,а также специфических мероприятий в тепловодных, форелевых, аквариумных хозяйствах . В настоящей главе рассмотрим подробнее общие профилактические мероприятия, обязательные для всех рыбоводных хозяйств

4.1 Ветеринарно–санитарная оценка при аэромонозе карпов

Аэромоноз (краснуха, геморрагическая септицемия, инфекционная водянка) – инфекционная болезнь карповых рыб, вызываемая бактерими из семейства Vibrionaceae, рода Aeromonas.

Распространение и экономический ущерб. Заболевание широко распространено в большинстве стран Европы, Азии и Южной Америки, где занимаются карповодством. Протекая чаще в форме эпизоотии, болезнь наносит большой экономический ущерб, складывающийся из потерь от значительной гибели рыб (25–90%) и больших затрат на оздоровление рыбоводных хозяйств.

Возбудитель болезни – патогенные штаммы бактерий Aeromonas hydrophila. Это короткая [(1,2–1,8) х (0,5– 0,6) мкм] грамотрицательная подвижная палочка с полярным жгутиком. Факультативный аэроб, спор и капсул не образует. Растет на обычных питательных средах при температуре 20–30°С (оптимум 25°С). На МПБ образует поверхностную пленку, равномерное помутнение среды, муаровые волны, хлопьевидный беловато-серый осадок. На МПА вырастают круглые выпуклые блестящие полупрозрачные с голубоватым оттенком колонии. За счет выделения бактериями цитохромоксидазы колонии дают положительную реакцию на оксидазу. В различных географических и климатических зонах образуют несколько серотипов. Высоковирулентные штаммы бактерий обладают гемолитическими свойствами; при экспериментальном заражении вызывают гибель карпов и белых мышей.

Эпизоотологические данные. Аэромонозом болеют карпы, сазаны и их гибриды в возрасте от сеголетков до производителей; восприимчивы серебряный карась, линь, белый амур, лещ, плотва и некоторые другие карповые рыбы. На возрастную восприимчивость рыб к аэромонозу влияют температура воды и зональные особенности болезни. В южных районах чаще болеют сеголетки и двухлетки, в центральных и северо-западных – двухлетки, трехлетки и производители карпов, сазана и их гибридов. Источником возбудителя инфекции являются больные рыбы, их выделения и трупы, а также рыбы – бактерионосители. Болезнь передается как прямым контактом больных рыб со здоровыми, так и непрямым – через зараженную воду и корма, с орудиями лова, инвентарем, тарой, спецодеждой, водоплавающей птицей, а также кровососущими паразитами (пиявками, аргулюсами). Особенно опасны бесконтрольные перевозки рыб из неблагополучных хозяйств.

Острые вспышки аэромоноза появляются в весенне-летний период при температуре воды 15–20 °С; к осени эпизоотия затухает и болезнь принимает подострое и хроническое течения.

Развитию болезни способствуют плотная посадка и травмирование рыб, ослабление их резистентности (неполноценное кормление, истощение) и неблагоприятные условия в прудах (нарушение гидрохимического режима, загрязнение органическими веществами и др.).

После переболевания рыбы приобретают относительный иммунитет.

Патогенез и симптомы болезни. Проникая в организм рыб, бактерии разносятся кровью во все органы и ткани, обусловливая септицемию. Выделяемые ими биотоксины оказывают токсигенное действие на сосудистые стенки, клетки и ткани, вызывают серозно-геморрагическое воспаление кожи, выпотевание транссудата и экссудата в рыхлую клетчатку и брюшную полость, дистрофические и некробиотические изменения в паренхиматозных органах.

Инкубационный период составляет 7–30 дней. Различают острое, подострое и хроническое течения болезни с последовательным переходом из одной стадии в другую.

Патологоанатомические изменения. Различают асцитную, язвенную и асцитно-язвенную формы. Асцитная форма характеризуется глубоким очаговым или разлитым серозно-геморрагическим дерматитом, проявляющимся отеком подкожной клетчатки и мускулатуры, эритродиапедезами, клеточной инфильтрацией и некрозом местных тканей (кожи и мышц). Нередко отмечают общий отек тела с сильной гидратацией мускулатуры.

Асцит проявляется скоплением в брюшной полости большого количества прозрачной или мутной жидкости с кровянистым оттенком или студневидной консистенции: серозно-фибринозный или гнойный перитонит, отек и набухание паренхиматозных органов, слипчивое воспаление.

Печень бледная, с желтоватым оттенком, пятнисто гиперемирована, дряблая, в ней преобладают тяжелые воспалительно-деструктивные изменения: застойная гиперемия синусоидов, перигландулит по ходу тяжей поджелудочной железы, зернисто-жировая и вакуольная дистрофия гепатоцитов, очаговый некроз паренхимы. Показательным является резкое снижение или исчезновение гликогена из печеночных клеток.

В более поздних стадиях развивается пролиферативно-клеточная реакция.

В кишечнике десквамативный катар с очаговыми геморрагиями на слизистой, а также истончением стенки. Селезенка и почки рыхлые. Они увеличены в объеме за счет воспалительного отека, гиперплазии гемопоэтической ткани, скопления макрофагов и пролиферации клеток РЭС (ретикуло-эндотелиальной системы). В мочевых канальцах наблюдают зернистую дистрофию эпителия, изредка гломерулонефрит.

В сердце отмечают перикардит с наличием потехиальных кровоизлияний. Головной мозг иногда с признаками отека и мелкоочаговыми некрозами.

При язвенной форме (хроническое течение) – поверхностные и глубокие язвы на теле, проникающие иногда до костей. Язвы имеют кратерообразную форму с красным ободком и серо-красноватым дном. Иногда встречают очаговый дерматит и выпадение чешуи. При заживлении язв образуются рубцы темно-фиолетового цвета. Отмечают искривление позвоночника (сколиоз, кифоз), деформацию костей головы и плавниковых лучей. Внутренние органы без существенных изменений. В печени отмечают склероз паренхимы и цирроз.

Асцитно-язвенная форма (подострое течение) характеризуется сочетанием признаков асцитной и язвенной форм. В зависимости от тяжести заболевания преобладают воспалительно-дегенеративные или пролиферативные процессы в органах.

Диагностика. Диагноз на аэромоноз ставят комплексно по результатам бактериологических исследований с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков и патолого-морфологических изменений. Патогенность выделенных культур проверяют постановкой биопробы на карпах массой 150–200 г. Серотипизацию вирулентных штаммов проводят при реакции агглютинации.

Аэромоноз карпов дифференцируют от весенней вирусной болезни (ВВБ), псевдомоноза, эритродерматита, некоторых токсикозов и болезней, сопровождающихся покраснением кожи. Весенней вирусной болезнью и псевдомонозом болеют карпы, растительноядные рыбы, караси и другие виды. Заболевания протекают остро или подострое без образования язв на теле.

Следует учитывать, что дерматит и язвенные поражения кожи редко бывают при травмах, действии местно-раздражающих ядов, осложненных факультативной микрофлорой.

Меры борьбы и профилактика. При возникновении аэромоноза карпов на неблагополучные рыбоводные хозяйства и естественные водоемы накладывают карантин. Оздоровление проводят путем летования прудов или комплексным методом.

Летование заключается в полном прекращении рыбоводного процесса: осенью пруды спускают, всю рыбу вылавливают, условно здоровую рыбу реализуют в торговую сеть, минуя контакт со здоровыми хозяйствами. Рыбоводные пруды не эксплуатируют весь год, в течение которого их очищают от ила, проводят дезинфекцию ложа и гидросооружений негашеной (из расчета 25 ц/га) или хлорной (из расчета 3–5 ц/га) известью, промораживают и просушивают, ложе засевают травами, овощами и др. Дезинфицируют орудия лова, тару, спецодежду кипячением или 4%-ным раствором формалина и другими средствами. После проведения всех ветеринарно-санитарных мероприятий пруды зарыбляют здоровой рыбой.