Сибирская язва

 При  молниеносном течении животное может погибнуть внезапно, без каких-либо клинических признаков. Если болезнь несколько затягивается, то появляются некоторые клинические признаки. Наблюдают сильное возбуждение, температура тела повышена, пульс учащен, дыхание глубокое, видимые слизистые цианотичны. Обычно животные гибнут через несколько минут после появления первых симптомов болезни во время сильного конвульсивного припадка.         

 Острое течение характеризуется  высокой температурой тела (41-42⁰ С). Лихорадке сопутствует мышечная дрожь. Пульс 80-100 ударов в минуту, сердечные толчки стучащие, дыхание ускоренное и прерывистое. Животное отказывается от корма, усиливается жажда. Видимые слизистые оболочки цианотичные. Животное угнетено, взгляд неподвижный, растерянный. Рот открыт, язык свисает изо рта, ноздри расширенны.         

 Подострое течение проявляется теми же клиническими признаками, что и острое. Различие заключается в том, что при подостром течении симптомы болезни нарастают медленно и временами могут ослабевать. В этот период животные кажутся здоровыми: они поедают корм. Однако через несколько часов состояние их резко ухудшается. Приступы болезни могут повториться 2-3 раза, на последней стадии вид испуганный, пучеглазие, застывший взгляд, зажатый корм в ротовой полости. У овец, коз и у крупного рогатого скота иногда появляются отеки и гиперемия кожи на внутренней стороне тазовых конечностей. У свиней отмечают сонливость, они заметно избегают воды.        

 Хроническое течение длится более 2 месяцев и характеризуется у жвачных и лошадей обычно слабым подъемом температуры тела, прогрессирующим истощением и профузным поносом. У свиней могут поражаться лимфатические узлы в области шеи. Однако очаги поражения в организме выявляют лишь при послеубойном осмотре.        

 Атипичное течение наблюдается очень часто, но из-за незначительных и нетипичных признаков при нем нередко ставят неправильный диагноз и лишь при лабораторном исследовании мяса и субпродуктов выявляют возбудителя сибирской язвы.        

 Карбункулезная форма может быть самостоятельной или сопутствовать септицемии, острому и подострому течению болезни. Карбункулы могут возникать на различных частях тела и достигать иногда больших размеров. В центре карбункула ткани некротизируются, отпадают, в результате образуется язва. Температура тела повышается незначительно.        

 Ангинозная форма как правило характеризуется длительным течением. Температура тела повышена незначительно. Обычно поражаются подчелюстные, заглоточные и шейные лимфатические узлы. Болезнь начинается в виде ангины. В области шеи образуется припухлость. Кожа в области шеи приобретает синевато-красный оттенок. Обнаруживают отеки языка и твердого неба.        

 Кишечная форма сопровождается расстройством органов пищеварения. Вначале отмечают запор, который сменяется диареей. Температура тела высокая и удерживается до 10 дней.         

 Несмотря на  наличие определенных клинических признаков у животных, диагноз на сибирскую язву только по клиническим симптомам установить трудно, так как при молниеносном течении они обычно не выражены, а при остром и подостром течениях похожи на признаки других болезней. Наиболее обоснованное подозрение на сибирскую язву бывает лишь при карбункулезной форме или при наличии отеков в подчелюстной форме. Особенно сложны случаи, когда сибирская язва протекает у животных атипично. Игнорирование лабораторных методов исследования  может привести к ошибке при постановке окончательного диагноза.        

 Паталогоанатомические изменения зависят от формы проявления и остроты течения болезни. Тем ярче они выражены, чем медленнее протекает болезнь, за исключением атипичного и хронического течения. Особенно характерные патологические изменения бывают при остром и подостром течениях болезни.        

 Труп  сильно вздут, окоченение отсутствует или выражено очень слабо. Из естественных отверстий выделяется пенистая  кровянистая жидкость, а иногда и кровь. Очень быстро, особенно в летнее время, наступает разложение трупа.        

 Подкожная клетчатка пронизана точечными геморрагиями и пропитана серозно-гемморагическим инфильтратом желтоватого цвета.        

 Мышцы кирпично-красного цвета, дряблой консистенции. В брюшной и грудной полостях, в сердечной сумке содержится большое количество мутной красноватой жидкости. На сердце под эпикардом имеются кровоизлияния. Лимфатические узлы увеличены, сочные, на разрезе кирпично-красные. Селезенка сильно увеличена (иногда в норме), полнокровная. Печень и почки увеличены незначительно. Они кирпично-красного или вишневого цвета.  Мочевой пузырь гиперемирован, множественные точечные кровоизлияния на слизистой оболочке. Тонкий отдел кишечника припухший, слизистая оболочка гиперемирована. Толстый отдел кишечника поражается редко. Легкие полнокровные, отечные. Слизистая оболочка дыхательных путей гиперемирована, отечна, усеяна экхимозами. Головной и спинной мозг гиперемированы с кровоизлияниями в вещество мозга и его оболочки.

5. Методы лабораторного диагноза.

5.1. Отбор патологического материала

С целью  личной безопасности отбор проб патологического  материала выполняется в спецодежде и резиновых перчатках.        

  При подозрении сибирской язвы для постановки прижизненного диагноза у больного животного (кроме свиней) берут кровь из уха. Для этого участок кожи с хорошо выраженным сосудом тщательно дезинфицируют и, надрезав сосуд, наносят капли крови на обезжиренные предметные стёкла. Место надреза сосуда тщательно дезинфицируют. Затем, после подсушивания мазка, стёкла прокладывают спичками, плотно обёртывают пергаментной бумагой, перевязывают и помещают в герметичный полиэтиленовый пакет. Пакет помещают в термос. К данному материалу прилагают сопроводительный документ с указанием хозяйства, вида животного, даты отбора проб крови. В лаборатории мазки после окраски по Граму исследуют под световым микроскопом с целью обнаружения капсул и делают посевы на питательные среды.         

 У  павшего животного при подозрении  сибирской язвы также берут  пробу крови. Если количества крови недостаточно, то проводят следующие манипуляции. Ухо со стороны, на которой лежал труп, перевязывают шпагатом в двух местах, ближе к основанию и отсекают между перевязкой. Места разреза прижигают калёным железом. Затем отрезанное  ухо помещают в герметичный пакет и в термос. Вскрытие трупа недопустимо ! Если вскрытие сделано, то с предосторожностью отбирают лимфатические узлы, кусочки селезёнки и печени, помещают в двойные  герметичные полиэтиленовые пакеты и в термос. От свиней пробы крови не берут. В качестве патологического материала используют кусочки воспалённой ткани в области отёка и заглоточные лимфатические узлы.        

 Для  исследования кожевенного сырья  от каждой кожи отрезают участок  величиной 3х3 см и надевают  на бечёвку, маркируют     и обеззараживают в камере Крупина при 0,7 атм. в течение 1 часа 45 минут.        

 5.2. Лабораторные исследования

В ветеринарных лабораториях в зависимости от их оснащения могут быть проведены следующие исследования: микроскопия мазков, бактериологические исследования с целью выделения чистой культуры и изучения их свойств, идентификация выделенной культуры, биопроба на лабораторных животных, серологические исследования.

5.2.1. Микроскопические исследования. Из доставленного патологического материала делают мазки, фиксируют этиловым спиртом с добавлением 3% перекиси водорода, окрашивают по Граму и на капсулу - по Михину, Ребигеру, Ольту или Романовскому-Гимза; при наличии люминесцентных сывороток используют метод флюоресцирующих антител.        

 В  масках, окрашенных по Граму, Bac. anthracis - грамположительная палочка (прямая). Палочки располагаются короткими цепочками или попарно, концы их, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены. В отдельных случаях (чаще в мазках от свиней) форма микробов сибирской язвы может быть нехарактерной (короткие толстые или изогнутые, иногда зернистые палочки со вздутием посередине или на конце, возможно наличие "теней" микробов).         

 В  окрашенных специальными методами мазках из патологического материала и среды ГКИ сибиреязвенные палочки окружены капсулой.        

 В  фиксированных препаратах капсулы бацилл хорошо окрашиваются всеми способами: Михина, Ребигера, Ольта, Романовского-Гимзы, Бурцева, Ионе, Кауфмана.

Окраска по Михину. Мазок окрашивают леффлеровской метиленовой синью в течение 2-3 минут, при этом его подогревают до появления паров. Краску быстро смывают водой, а мазок высушивают фильтровальной бумагой. Бациллы - тёмно-синие, капсулы- светло-розовые.

Окраска по Ребигеру. 15-20 г генцианвиолета растворяют в 100-150 мл 40% формалина, тщательно и многократно взбалтывают и дают отстоятся несколько часов, затем фильтруют. Полученным раствором окрашивают нефиксированные мазки. Бациллы -тёмно-фиолетовые, капсулы фиолетово-розового цвета.

Окраска по Ольту. В 100 мл кипящей дистиллированной воды растворяют 3 г сафранина, после охлаждения фильтруют. Красят 1-2 мин. Бациллы - красные, капсулы - жёлтые.

Окраска по Романовскому-Гимзе. На фиксированный мазок наносят краску, выдерживают в течение 15-20 минут и быстро смывают. Бациллы тёмно-синие, капсула розовая или бледно-розовая.        

 По  результатам микроскопического исследования немедленно дают предварительный ответ. В случае обнаружения капсульных форм бацилл диагноз на сибирскую язву считают установленным и дальнейшие исследования продолжают в соответствии с инструкцией.         

 5.2.2. Посев на питательные среды. Посевы из исходного патологического материала делают в МПБ и на МПА или в бульон и на агар Хоттингера (рН 7,4). Одновременно можно делать посевы на дифференциально-диагностическую среду с 0,01 %  фенолфталеинфосфата натрия, а также на желатин, кровяной бульон и агар, среду ГКИ (60 % стерильного раствора Хенкса без антибиотиков и 40 % стерильной неконсервированной сыворотки крупного рогатого скота, инактивированной при 56-58⁰С в течении 30 мин, рН 7,2-7,4).        

 Посевы инкубируют 18-24 ч при температуре 37-38 (С и при отсутствии роста выдерживают при той же температуре еще 48 часов.        

 После  суточного роста сибиреязвенных  бацилл МПБ остается прозрачным, а на дне образуется рыхлый, в виде комка ваты осадок, разбивающийся при встряхивании. Из бульонной культуры делают мазки, окашивают по Граму и микроскопируют. В мазках обнаруживают цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек или парно расположенные палочки. На плотных питательных средах бациллы сибирской язвы образуют плоские матово-шероховатые колонии. Под малым увеличением микроскопа колонии имеют вид сплетённых нитей («голова медузы»). При посеве уколом в столбик 10-12% желатины бациллы на 2-5 сутки образуют желтовато-белый стержень.

5.2.3.Биологическая проба. Исследуемый патологический материал (в день поступления) суспендируют в небольшом объеме 0,9%-ного раствора натрия хлорида, вводят двум белым мышам в дозе 0,2-0,5 мл под кожу спины ближе к корню хвоста или 0,5-1 мл двум морским свинкам подкожно в области живота. Гибель животных наступает через 1-3 сут, иногда позже.  

5.2.4. Окраска сибиреязвенных спор. Для этой цели используют методы: Ауески, Златогорова, Дорнера, Пешкова, Мюллера, Трухильо, Клейна, Шеффера, Фултона и др. Лучше окрашиваются споры методом Ауески и особенно Трухильо.

5.2.5. Реакция преципитации по Асколи.

Реакцию ставят в уленгутовской пробирке. Для этого в уленгутовскую пробирку вносят 0,2-0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки и затем осторожно наносят равное количество экстракта проб специально подготовленного (горячий или холодный способ) патологического материала. При положительной реакции через 10-12 минут на границе соединения компонентов обнаруживают характерный серовато-белый диск (преципитирующее кольцо).        

 5.2.6. Идентификация возбудителя сибирской язвы.

Применительно к возбудителю сибирской язвы имеется большая группа микробов-сапрофитов, близкородственных Bac.anthracis по основным культурально-морфологическим и биохимическим свойствам (Bac. anthracoides, Bac.pseudoanthracis, Bac. cereus, Bac. mesentericus, Bac.megaterium, Bac. subtilis, Bac. mycoides). 

Идентификацию проводят по следующим признакам: морфология микроба, включая наличие капсул в мазках из исходного патологического материала или органов павших подопытных животных (сапрофиты капсул не имеют); культуральные свойства; патогенность для лабораторных животных (гибель хотя бы одного из двух лабораторных животных, зараженных суспензией из исходного патологического материала или полученной культурой возбудителя, с последующим выделением ее из органов мыши или морской свинки. Сапрофиты непатогенны для морских свинок и кроликов)