Применение иммуногистохимических методов в медицине

Установлено, что из многих ростовых факторов, участвующих в ангиогенезе, VEGF (фактор роста сосудов эндотелия) является самым мощным и доминирующим медиатором этого процесса. VEGF - гликопротеин, связывающийся только с эндотелиальными клетками и стимулирующий их пролиферацию. Этот фактор усиленно продуцируется клетками опухолей человека, способствуя неоваскуляризации опухоли и, возможно, связанной с этим ранней ее диссеминации. Помимо ангиогенного действия, VEGF значительно усиливает проницаемость сосудов.

Экспрессия VEGF значительно ниже в опухолях, не содержащих р53 мутантного типа и с низкой степенью васкуляризации. Уровень экспрессии VEGF в плоскоклеточных карциномах обратно коррелирован с общей выживаемостью пациентов и был выше в опухолях легкого с метастазами в лимфоузлы. VEGF считается важной терапевтической мишенью при разработке антиангиогенных противоопухолевых препаратов.

Оценка ангиогенеза в опухоли считается одним из маркеров прогноза течения заболевания, наличия метастазов и чувствительности к противоопухолевой терапии. Возникновение метастазов - основная причина смертности больных раком, поэтому идентификация маркеров, тесно связанных с метастатическим потенциалом каждой отдельной опухоли, клинически необходима для планирования терапии больных раком.

Появляется все большее количество доказательств, что метастазирование, как на ранних, так и на поздних стадиях зависит от степени васкуляризации опухоли. При метастазировании гематогенным путем опухолевые клетки должны прикрепиться к эндотелию, пройти в просвет сосуда, выжить в циркулирующей крови, остановиться в какой-либо отдаленной ткани и образовать там колонию. Клиническая значимость определения количества сосудов в опухоли продемонстрирована для опухолей различных типов: чем выше плотность сосудов, тем хуже прогноз для пациента. Высокоангиогенные первичные опухоли с высокой внутриопухолевой плотностью сосудов обладают большей способностью дать в отдаленном органе ангиогенный клон, который при благоприятных условиях образует метастаз.

Проводится огромное количество исследований, подтверждающих, что ангиогенез в опухоли является независимым прогностическим маркером. Хотя имеются значительные различия в исследованных группах пациентов и используемых методах оценки ангиогенеза, большинство исследований продемонстрировали обратную связь между опухолевой васкуляризацией и выживаемостью пациентов. Этот факт характерен для опухолей различных локализаций, в частности, для рака молочной железы, рака шейки матки, рака легкого, рака простаты, рака пищевода, рака мозга, рака мочевого пузыря, рака яичка, рака пищевода, рака прямой кишки, мягкотканных сарком, опухолей головы и шеи и т.д.

Главное требование для новых прогностических маркеров - их биологическая роль, должна быть связана с агрессивностью каждой отдельно взятой опухоли. Плотность микрососудов в опухоли как прогностический маркер полностью отвечает этому требованию по нескольким причинам. Во-первых, ангиогенез необходим для перехода от преинвазивной (карцинома in situ) к инвазивной стадии первичной опухоли. Во-вторых, в инвазивных опухолях, даже в одинаковых гистологических типах, ангиогенная активность опухоли различается, что показано на примере опухолей молочной железы. Это делает возможным разделить пациентов по степени ангиогенной активности опухоли. В-третьих, клинико-патологические исследования показали, что плотность микрососудов в опухоли не связана с экспрессией некоторых других биологических маркеров, включая P53, C-erbB-2, EGFR, рецепторов гормонов. Это - биологическая основа независимой оценки ангиогенеза как прогностического маркера. И, наконец, высокая ангиогенная активность опухоли способствует развитию местных и отдаленных метастазов.

Широко используемым методом оценки ангиогенеза в опухолях человека является подсчет микрососудов в первичной опухоли с помощью специфических маркеров эндотелиальных клеток, таких как VIII-фактор, CD31, CD34, и стандартной иммунопероксидазной техники окраски сосудов.

Согласно работам, наиболее чувствительным из доступных панэндотелиальных маркеров являются антитела к фактору CD31. Он распознает большее количество микрососудов, чем другие эндотелиальные маркеры. В частности, CD34 и VIII-фактор окрашивают не все опухолевые сосуды, а антитела к VIII-фактору реагируют также с лимфоцитами. Однако специфичность антител к CD31 тоже не абсолютна, так как они дают положительную реакцию с плазматическими клетками. Следует подчеркнуть, что описанные маркеры окрашивают как покоящийся, так и активированный/пролиферирующий эндотелий.

 

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

 

В заключение следует отметить, что определение и исследование биологических характеристик ангиогенеза опухолей может иметь важнейшее значение не только для лучшего понимания причин развития первичной опухоли и метастазов, но и для лучшего планирования лечения. За последнее время наши знания о биологических процессах, вовлеченных в формирование новых микрососудов, значительно расширились. И хотя прогностические и терапевтические принципы еще только формируются, достижения в понимании патологии ангиогенеза используются в клинической практике и, возможно, оценка ангиогенеза будет применяться в рутинной клинической деятельности.

Иммуногистохимические исследования с целью оценить органоспецифичность отдаленных метастазов проводятся с использованием набора антител, характеризующих антигенные свойства клеток различных органов: в частности, антитела к PSA выявляют рак простаты; наличие в опухолевой ткани рецепторов к эстрогенам и прогестерону позволяет сделать предположение о метастазе из молочной железы или эндометрия; антитела к тиреоглобулину выявляют опухолевые клетки фолликулярного рака щитовидной железы. Большую помощь в определении органной принадлежности метастазов оказывают антитела к различным цитокератинам.

С целью прогностической оценки заболевания, предсказания биологического поведения опухоли, появления метастазов, эффективности терапии проводят исследование пролиферативной активности (Ki-67), выраженности ангиогенеза, определение рецепторов факторов роста (продукты онкогенов her-2/neu при раке молочной железы), выявление рецепторов к стероидным гормонам, изучение степени анаплазии клеток (мутантный белок гена p53).

Несомненна роль ИГХ исследования при определении рецепторов к эстрогенам и прогестерону для назначения ряда гормональных препаратов (тамоксифен).

Таким образом, ИГХ представляет ценный современный метод диагностики, позволяющий определить гистогенез, степень пролиферативной активности и анаплазии опухолевых клеток, охарактеризовать прогноз и предложить адекватные методы лечения пациентов. Однако не следует и преувеличивать возможности данного метода при лечении конкретного пациента. ИГХ является только дополнительной методикой исследования, и ее результаты должны быть интерпретированы в контексте с другими данными обследования, включая клинические.

 

 

 

 

 

 

 

Литература.

 

1. Бабиченко И.И., Ковязин В.А. Новые методы иммуногистохимической диагностики опухолевого роста: Учеб. пособие. – М.: РУДН, 2008. – 109 с.
2. Сенников С.В., А.Н. Силков (Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4, № 1. С. 22-27)
3. Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А. - Гистология, цитология и эмбриология (1989) "Медицина".
4. Кузнецов С.Л., Мушкамбаров Н.Н. - Атлас по гистологии, цитологии и эмбриологии "МИА" 2002