Группы крови

     Наиболее  активным из всех антигенов является Rh0(D). В зависимости от его наличия или отсутствия кровь людей делят на резус-положительную (Rh+) или резус-отрицательную (Rh-).

     Указанные 6 антигенов резус встречаются  в эритроцитах в виде одного из 18 возможных сочетаний. Фенотипически  каждый человек содержит 5, 4 или 3 антигена резус в зависимости от количества генов, по которым он гомозиготен. Однако генотипическая формула изображается шестью буквами, например cDE/CDe, обозначающими 3 гена резус, унаследованных с хромосомой одного из родителей, 3 - с хромосомой другого.

     Иначе подходят к оценке резус-принадлежности лиц, являющихся донорами. Требуется  дополнительное исследование крови доноров по факторам rh и rh. Резус-отрицательными могут быть только доноры, в крови которых отсутствуют все три антигена (Rh0, rh, rh). Такой подход к оценке резус-принадлежности доноров позволяет исключить возможность сенсибилизации реципиента к любому из трех основных антигенов: Rh"(D), rh(C), rh(E).

     Резус-антитела, являясь иммунными (неполными, моновалентными, блокирующими), характеризуются способностью фиксироваться к резус-положительным  эритроцитам, не вызывая их склеивания. Они агглютинируют эритроциты только в присутствии коллоидных растворов, протеолитических ферментов или под действием специально приготовленной антиглобулиновой преципитирующей сыворотки. Неполные антитела относят к классу иммуноглобулинов IgG.

     Наличие резус-антигена выявляется у человеческого плода начиная с 5-8 недели и хорошо выражено у 3-4-месячного эмбриона.

     Существование антигенов системы резус в  эритроцитах человека является физиологическим, антител к этим антигенам в  организме нет. Образование иммунных антител происходит при поступлении в организм человека чужеродного ему изоантигена. У сенсибилизированных людей антитела анти-Rh содержатся не только в крови, но и в экссудате, транссудате, моче, слезе и других средах. 
 

     2.2 Способы определения резус-фактора

     Все методы определения резус-фактора делятся на способы, применяемые в клинике: в условиях приемного покоя, в операционной, на отделении у постели больного и т. д., не требующие специального лабораторного оснащения, и лабораторные способы.

     Используются  два так называемых зкспресс-метода:

• Экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.
• Экспресс-метод на плоскости без подогрева.

     Для исследования может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца (из вены) непосредственно перед исследованием, или консервированная кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.  

     Методика  проведения реакции.

     Исследование  проводят в центрифужных пробирках  объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы AB(IV), содержащую 33% раствор полиглюкина. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов).

     Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам.

     Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как  правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса "антиген - антитело" и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут.

     Затем для исключения неспецифической  агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путем одно-двукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания).  

     Оценка  результатов.

     Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветленной жидкости) указывает  на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови. 

     2.3 Экспресс метод определения Rh-фактора на плоскости без подогрева. Методика проведения реакции

     На  белой пластинке со смачиваемой поверхностью пишут фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется. На левом краю пластинки делают надпись "сыворотка - антирезуо, на правом - "контрольная сыворотка". Последней служит разведенная альбумином сыворотка группы АВ (IV), не содержащая антител анти-резус.

     Соответственно  надписям на пластинке помещают по 1-2 капли (0,05-0,1 мл) реактива антирезус  и контрольной сыворотки. К обеим  каплям добавляют исследуемые эритроциты. Кровь размешивают с реактивом  сухой стеклянной палочкой, размазывая на пластинке до образования капли диаметром 1,5 см.

     Пластинку слегка покачивают. Через 3-4 минуты для  снятия возможной неспецифической  агглютинации к каждой капле добавляют 5-6 капель физиологического раствора. Затем пластинку покачивают в  течение 5 минут.  

 

     Оценка  результатов

     Результат оценивают по наличию или отсутствию агглютинации невооруженным глазом.

     Наличие хорошо выраженной агглютинации в капле слева указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации в этой капле (гомогенная окраска) говорит о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови (Rh-).

     Результат считается истинным лишь при отсутствии признаков агглютинации в правой (контрольной) капле. 

     2.4 Лабораторные способы определения резус-фактора

     Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории  применяют четыре основных метода.  

     Метод агглютинации в солевой среде.

     Используют  специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом  растворе хлорида натрия соединяют  в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 час в термостат  при температуре 37°С, после чего осадок эритроцитов на дне пробирки рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат.

     При положительном результате (Rh+) осадок имеет характерный рисунок в  виде нитей или зернистости. При  отрицательном (Rh-) осадок размещается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга.  

     Метод коиглютинации с  желатином.

     В пробирку помещают равные объемы исследуемых  эритроцитов, антирезусной сыворотки  и 10% раствора желатина. Пробирки инкубируют при температуре 45-48°С, после чего добавляют десятикратный объем физиологического раствора. Пробирки 2-3 раза переворачивают и учитывают результат по наличию агглютинации, видимой невооруженным глазом.  

     Непрямой  антиглобулиновый тест (реакция  Кумбса).

     Эта реакция является наиболее чувствительной для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. К ней, как правило, прибегают при возникновении трудностей в определении резус-принадлежности крови, связанных с нечеткими результатами, полученными при других методах исследования. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки (АГС).

     При обработке резус-положительных эритроцитов  неполными антителами анти-Rh наступает  их обволакивание (сенсибилизация) по отношению к АГС, которая и  агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам.

     В пробирку вносят антирезусную сыворотку  и отмытые физиологическим раствором  эритроциты; помещают на 1 час в термостат  при температуре 37°С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий  этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат.

     Наличие агглютинации является показателем  того, что исследуемый образец  крови резус-положительный. Если агглютинация отсутствует, испытуемая кровь - резус-отрицательная. 

     2.5 Реакция с анти-Б-моноклональнымн антителами

     На  планшете смешивают большую каплю (ОД мл) анти-Б-монокло-нальных антител (МКА) и маленькую каплю (0,01мл) исследуемой  крови.

     За  реакцией наблюдают в течение 2,5 мин. При смешивании анти-D-MKA с образцами резус-положительных эритроцитов отмечается быстро наступающая лепестковая агглютинация. Если кровь резус-отрицательная - агглютинация отсутствует.

     Возможные ошибки:

     Чаще  всего ошибки являются следствием методических погрешностей при проведении исследования, в особенности при использовании конглютинационных методов.

     К ложным результатам может привести неправильное соотношение между  сывороткой и эритроцитами, преждевременная  оценка результатов, оценка результатов по высыхающей капле, определение резус-фактора в гемолизированном и длительно хранящемся образце крови, а также использование неактивных, инфицированных и загнивших сывороток, использование сывороток с истекшим сроком годности.

     Причиной  ошибок могут быть биологические особенности испытуемой крови: снижение агглютинабельности резус-антигена при некоторых заболеваниях печени, почек, системы крови, а также неспецифическая агглютинация испытуемых эритроцитов. В случае сомнительных результатов исследование повторяют, применяя более активные антирезусные сыворотки.

     Белок состоит из 20 аминокислот, каждая из которых обозначается своей буквой. Ген (последовательность нуклеотидов, соответственно, в 3 раза более длинная  последовательность, записанная только четырьмя буквами, а не 20), который кодирует резус-белок, называется RHD.

     У большинства людей (85%) имеется ген  резус-фактора, но у 15% этот ген отсутствует, отсутствует соответствующий гену нуклеотидный "текст" . Если этот ген присутствует, то он определяет у человека синтез резус-белка. Если же его нет, то резус-белок не синтезируется.

     Такие разные "состояния" гена – вариации нуклеотидного "текста" называются альтернативными формами или  коротко –аллелями. В данном случае вариация – это наличие или  отсутствие всей нуклеотидной последовательности гена.

     У человека может встречаться 3 варианта сочетания резус-аллелей. Человек, у  которого 2 аллеля с присутствующим геном, имеет группу крови резус  положительную (рис. 4 вверху). Если у  человека на одной из хромосом ген отсутствует, то белок все равно синтезируется с гена на другой хромосоме; и резус-группа также положительная (рис. в середине). Белок не синтезируется только в том случае, когда ген отсутствует на обоих хромосомах. Только в этом случае группа крови резус-отрицательная.

 

     2.6 Значение групповой дифференциации

     Групповые антигены и антитела крови имеют  большое значение в физиологии и  патологии человека. Прежде всего надо иметь в виду, что антигены крови являются маркерами генотипа каждого индивидуума. Этот факт имеет значение для плодовитости браков, течения и исходов беременности и здоровья новорожденных.

     Половые клетки, соответственно генотипу, имеют антигены, аналогичные групповым антигенам крови, а супруги часто отличаются по своей группе крови. Несовместимость супругов по системе резус является одной из наиболее частых причин иммунологического конфликта при беременности, который приводит к гибели плода или гемолитической болезни новорожденного.

     В настоящее время все больше появляется данных о статистически значимых связях групп крови с инфекционной и неинфекционной патологией человека. Наличие некоторых эритроцитарных и лейкоцитарных антигенов создает условия для большей вероятности некоторых заболеваний. В частности, известно, что язвенная болезнь наиболее часто встречается у пациентов с группой крови А(П), а наличие антигена HLA-B18 предрасполагает к заболеванию гепатитом В, а если при этом у человека имеется еще антиген HLA-B5, то наиболее вероятно хроническое течение заболевания.

     Имеется определенная связь иммунологической реактивности и лейкоцитарных групп  по системе HLA. Например, индивидуумы, имеющие  антиген НЬА-В8, являются более активными продуцентами антител вообще, а при наличии антигена HLA-B35 дают активную выработку антител к столбнячному анатоксину. Таких примеров великое множество. Подобные данные имеют большое значение для определения групп риска и направленной диспансеризации, а также при профессиональном отборе.