Технология изготовления сухого экстракта травы Репешка обыкновенного

     3.3.2. Очистка вытяжки

     Водные  и водно-спиртовые вытяжки с  малым количеством этанола (20–40%) содержат много высокомолекулярных соединений (водорастворимые белки, сахара, ферменты, пектины, слизи, крахмал), которые до выпаривания должны быть обязательно удалены. В зависимости от количества и свойств балластных веществ используют различные методы очистки. В ряде случаев очистку проводят кипячением если нет инактивации БАВ. Свернувшиеся при этом белки быстро отслаиваются. Иногда применяют адсорбенты (каолин, бентониты, тальк и т. п.) или сочетание адсорбентов с кипячением. Часто применяют способ удаления балластных веществ путем осаждения их спиртом. Спиртоочистка проводится с предварительным упариванием вытяжек до половинного объема по отношению к массе исходного сырья. После охлаждения к ней добавляют двойной объем крепкого (95 – 96%) этанола. Все тщательно перемешивают и оставляют на 5-6 дней при температуре не выше 10°С. Отстоявшийся слой сливают с осадка и фильтруют. Очищенную вытяжку, при необходимости, подвергают дальнейшему сгущению. Также с целью освобождения вытяжки от балластных веществ проводят отстаивание в течение нескольких дней при температуре не выше 8°С, после чего жидкий экстракт подвергают фильтрованию или центрифугированию.

     Для вытяжек хлороформных (четыреххлористого  углерода) применяют метод замены экстрагента. При этом к упаренной  до половинного объема по отношению к массе исходного сырья вытяжке добавляют воду в количестве, равном массе сырья. Растворимые в хлороформе (четыреххлористом углероде) хлорофилл, смолистые вещества выпадают в осадок, так как они не растворяются в воде. Вытяжку отстаивают, фильтруют и подвергают дальнейшей обработке.

     В сухих экстрактах определяют влагу  и тяжелые металлы согласно Государственной фармакопеи Х издания (ГФ Х).

     Сухие концентраты отличаются от обычных сухих экстрактов тем, что содержание действующих веществ в них равно содержанию в исходном сырье, т. е. (1:1) (только для сухого концентрата ландыша оно равно половинному количеству (1:2). Следовательно, для приготовления настоев и отваров из сухих концентратов вместо прописанного по рецепту количества лекарственного сырья берут одинаковое по массе количество сухого концентрата и растворяют в рассчитанном объеме воды.

     При получении экстрактов в качестве экстрагента используют этанол низких концентраций (от 20 до 40%). Это объясняется  стремлением приблизить концентраты по составу экстрагируемых веществ к аптечным водным извлечениям.

     Сухие концентраты получают аналогично жидким экстрактам. Получение вытяжки проводят до полного истощения сырья, используя чаще высокоэффективные методы (для алтейного корня применяют мацерацию). Для очистки вытяжек применяют отстаивание и последующее фильтрование.

     3.3.3. Сгущение экстракта и высушивание

       Высушивание может проводиться  через стадию сгущения. В этом  случае применяют все типы  аппаратов, используемых для упаривания  вытяжек. Последующее высушивание проводится в вакуум-вальцовых сушилках или вакуум-сушильных шкафах при 50-60°С. Если высушивание проводят без стадии сгущения, то применяют распылительные, сублимационные (лиофильные, молекулярные) сушилки.

     Наполнители, в качестве которых используют декстрин, молочный сахар или смеси, вводят во время размола высушенного экстракта. Стандартизацию сухих концентратов проводят по содержанию влаги и тяжелых металлов. 
 
 
 
 
 

     4. Технология изготовления сухого экстракта травы репешка обыкновенного

     4.1. Материалы и методы  исследования

     Посуда  и оборудование:

     водяная баня

     обратный  холодильник

     спектрофотометр СФ-56

     весы  лабораторные

     хроматографическая  камера

     УФ-облучатель

     сушильный шкаф

     испаритель  ротационный ИР-1

     Посуда  и реактивы:

     колба мерная 100 мл

     колба коническая

     колба круглодонная

     воронка

     пипетка 1 мл, 5 мл

     мерный  цилиндр 25 мл, 100 мл

     спирт этиловый (96%, 70%, 40%)

     вода  очищенная

     кислота уксусная ледяная

     этилацетат

     муравьиная  кислота

     раствор алюминия хлорида 5%

     раствор аммиака 10%

     Для проведения качественных и количественных исследований сырья и экстракта травы репешка обыкновенного были использованы следующие методы:

1. спектрофотометрия
2. тонкослойная хроматография

     Для получения сухого экстракта травы  репешка обыкновенного был использован  метод перколяции в системе из трех перколяторов.

     Технология  изготовления сухого экстракта травы репешка обыкновенного включала несколько последовательных операций:

     4.2. Подготовка лекарственного растительного сырья (травы репешка обыкновенного)

1. измельчение в шаровой мельнице в течение 5 минут;
2. просеивание измельченного сырья через сито с диаметром отверстий равным 3 мм. Рекомендуемая степень измельчение трав составляет 3-5 мм;
3. определение влажности сырья. Проводилось по стандартной методике ГФ (XI издание) «Определение влажности лекарственного растительного сырья». Влажность составила 8,04%.

     4.3. Выбор оптимального экстрагента

     Для определения подходящего экстрагента проводили экстракцию измельченной травы репешка обыкновенного спиртом разной концентрации 40%, 70%, 96% и водой. Выбор экстрагента производили на основании содержания в экстракте флавоноидов. Количественное определения содержания флавоноидов проводили по стандартной методике ГФ (XI издание). Химизм данной методики сводится к взаимодействию флавоноидов с алюминия хлоридом с образованием окрашенного комплекса и последующей спектрофотометрией. Максимум спектра поглощения во всех случаях наблюдался при длине волны 401 нм, что соответствует кемпферолу.

     Содержание  флавоноидов в экстрактах в пересчете на кемпферол и абсолютно сухое сырье в процентах (Х_1, Х₂, Х₃, Х₄) вычисляли по формуле:

      ; где

     А – оптическая плотность исследуемого раствора;

     ω_1, ω₂ – разведение, мл;

     Е – удельный коэффициент поглощения кемпферола;

     l – толщина слоя кюветы;

     а – навеска измельченной травы репешка обыкновенного, г;

     V_a - объем экстракта, взятый на анализ, мл;

     В – влажность измельченной травы репешка обыкновенного, %.

     Зависимость выхода биологически активных веществ  от используемого экстрагента представлена в виде диаграммы:

     Зависимость выхода флавоноидов от экстрагента

     

     Рис. 2.

     Таким образом, наибольшее количество флавоноидов  позволяет получить использование  в качестве экстрагента 70% этанола.

     4.4. Определение коэффициента поглощения спирта этилового 70% для травы репешка обыкновенного

     Для определения коэффициента поглощения брали 5 г сырья, помещали в стеклянный цилиндр, заливали 20 мл этанола 70% и  проводили настаивание в течение 72 часов. Объём спирта, слитого после настаивания составил 12,5 мл.

     Коэффициент поглощения (К_П) рассчитывали по формуле:

       где

     V – начальный объём экстрагента, мл;

     а – объем экстрагента, слитого после настаивания, мл;

     Р – масса сырья, г.

Коэффициент поглощения экстрагента для травы репешка обыкновенного  составил – 1,5.

     4.5. Определение массы травы репешка обыкновенного для получения сухого экстракта

     Общая масса сырья составила 50 г.

     Массу сырья на одну (m_C) ступень рассчитывали по формуле:

            .

     m_C.общ – общая масса травы репешка обыкновенного, г (50 г);

     n – количество перколяторов (3).

     Масса сырья на одну ступень составила 16,6 г. 

     4.6. Определение объема спирта этилового 70% для получения сухого экстракта

     А. Общий объем экстрагента (V_Э.общ) рассчитывали по формуле:

      где

     К_П – коэффициент поглощения травы репешка обыкновенного;

        -  соотношения фаз (2).

     Общий объем экстрагента составил – 175 мл.

     Б. Объем экстрагента на одну ступень  (V_Э) для перколяции рассчитывали по формуле:

      где

     V_Э.общ – общий объем экстрагента для получения первичной вытяжки, мл;

     Объем экстрагента на одну ступень для  перколяции составил 58,3 мл.

     4.7. Получение жидкого экстракта

     Жидкий  экстракт травы репешка обыкновенного  получали методом реперколяции в системе из трех перколяторов.

     Измельченное  сырье в количестве 16,6 г укладывали в перколятор и смачивали, заливали экстрагентом в количестве 58,3 мл до «зеркала» и оставляли на сутки, затем полученную вытяжку сливали. Процесс проводили до получения вытяжки необходимого объема. Полученную вытяжку использовали для получения новой партии препарата.

     4.8. Очистка жидкого экстракта

     Очистку проводили отстаиванием в течение  пяти дней при температуре не выше 8°С, после чего жидкий экстракт подвергали фильтрованию.

     4.9. Получение сухого экстракта

     Полученный  жидкий экстракт упаривали под вакуумом и на водяной бане, после чего высушивали в сушильном шкафу.

     4.10. Оценка внешнего вида

     По  внешнему виду сухой экстракт представлял  собой темно-бурую массу  горького вкуса, со специфическим запахом.

     4.11. Содержание действующих веществ

     Установление  подлинности сухого экстракта проводили  на основании содержания флавоноидов методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей этилацетат – муравьиная кислота – уксусная кислота – вода (100:11:11:26). Хроматографическую пластинку высушивали, проявляли раствором аммиака и просматривали в ультрафиолетовом свете. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

     Заключение

     В процессе разработки технологии изготовления сухого экстракта травы репешка  обыкновенного:

• был подобран экстрагент для получения вытяжки из травы репешка обыкновенного с максимальным содержанием действующих веществ;
• рассчитан коэффициент поглощения экстрагента (спирта этилового 70%) для травы репешка обыкновенного.