Автор работы: Пользователь скрыл имя, 15 Декабря 2014 в 19:57, реферат
Описание работы
Бумажная хроматография — метод анализа состава исследуемого образца. Был открыт в 1944 году Констоном, Гордоном, Мартином и Сенджем, которые использовали его для анализа смесей аминокислот. Бумажная хромотография (БХ), вид хроматографии. основанный на различии в скорости перемещения компонентов анализируемой смеси по бумаге в потоке растворителя (элюента).
Содержание работы
Введение 1. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКАЯ БУМАГА 2. АППАРАТУРА ДЛЯ БУМАЖНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ 2.1 ПИПЕТКИ ДЛЯ НАНЕСЕНИЯ ПРОБ 2.2 АППАРАТУРА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ 2.3 АППАРАТУРА ДЛЯ ЭЛЮИРОВАНИЯ ПЯТЕН 3. ВЫБОР РАСТВОРИТЕЛЕЙ (ПОДВИЖНОЙ ФАЗЫ) 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВЕЛИЧИН Rf И Rm ИХ ИЗМЕРЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ 5. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ БУМАЖНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ 6. БУМАЖНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОРОДСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ 7. БУМАЖНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ Список использованной литературы
5.КОЛИЧЕСТВЕННАЯ
БУМАЖНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Существует несколько
способов количественного анализа посредством
БХ. Можно экстрагировать зоны с хроматограммы
и затем провести количественный анализ
методом колориметрии, флуориметрии, адсорбционной
спектроскопии, полярографии, радиометрии,
биологических испытаний и т. д. или сначала
обнаружить вещества на бумаге путем опрыскивания,
т. е. по цветной реакции, а затем экстрагировать
и исследовать колориметрически. В последнем
случае требуется проводить обнаружение
возможно более квалифицированно, равномерно
и непрерывно нанося реагент на всю хроматограмму.
Только таким Образом можно получить правильную
калибровочную кривую. Поэтому лучше погрузить
хроматограмму в обнаруживающий реагент,
а не опрыскивать ее. Можно также сделать
пятна видимыми с помощью эффективного
метода обнаружения (см. выше) и провести
денситометрическое исследование их,
применив подходящий денситометр. Денситометрию
можно проводить в отраженном или проходящем
свете. В первом случае нулевая линия (линия
фона) получается более правильной; в проходящем
свете бумага выглядит мутной, и поэтому
нулевая линия не выходит достаточно ровной.
В этом случае также необходимо строить
калибровочную кривую по стандартным
пробам и с ее помощью определять количество
данного компонента. Вместо непосредственного
денсйтометрического исследования можно
также сфотографировать или иным подходящим
способом скопировать хроматограмму и
проводить денситометрирова-ние не самой
хроматограммы, а ее негативной или позитивной
копии. Учитывая неоднородность (мутность)
бумаги, многие авторы применяют метод
просветления хроматограмм перед ден-ситометрией,
пропитывая хроматограммы парафиновым
маслом. После того как денситометрирование
закончено, необходимо провести оценку
записанных денситометром пиков, сравнив
их с пиками стандартных проб, т, е. с построенной
по стандартным пробам калибровочной
кривой. Иногда достаточно измерить высоту
пиков, но чаще всего именно площадь между
контуром пика и нулевой линией пропорциональна
количеству вещества. Эту площадь можно
определить планиметрированием, можно
также скопировать хроматограмму, вырезать
пики и взвесить их, можно также воспользоваться,
как предлагают Турина и др. [131]1, методом
Монте-Карло. Площадь пиков правильной
формы можно определить расчетным путем,
умножая высоту пика на его полуширину,
или другим подобным методом.
6.БУМАЖНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОРОДСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ
В первом приближении
полярность и хроматографическая подвижность
соединений, содержащих, кроме атомов
углерода-и водорода, только атомы кислорода,
определяется соотношением числа атомов
углерода и кислорода в молекуле. Чем выше
это соотношение, тем более липофильно
вещество, и наоборот (см. разд. 3.1.3). Например,
у стеарилового спирта (атомарное отношение
С/0 = 18) преобладает липофильный характер.
Это соединение совсем не растворяется
в воде, но легко растворяется в петролейном
эфире. В то же время метиловый спирт (С/0=1)
образует две фазы при смешивании с петролейным-эфиром
(особенно с его высшими фракциями) и полностью
смешивается с водой. Другими примерами
подобного рода могут служить гексиловый
спирт (С/О = 6) и гексозы (С/0=1). Первый плохо
растворим в воде, но легко растворяется
в липофильных растворителях, а для гексоз
справедливо обратное. Следует однако
иметь в виду, что не все кислородсодержащие
функциональные группы одинаково влияют
на полярность, т. е. на гид-рофильность.
Наиболее гидрофильна гидроксильная группа,
за-ней следуют альдегидные и кетонные
группы, а далее кислород простых или сложных
эфиров. Карбоксильная группа по своей
полярности подобна гидроксильной, однако
она несколько менее гидрофильна в кислотных
липофильных системах, тогда как. в основных
растворителях ее вклад в гидрофильность
молекулы значительно больше, потому что
она переходит в карбоксилат-анион, который,
конечно, значительно более полярен.
Соединения с простыми
эфирными группами обнаруживаются значительно
труднее, чем соединения со сложными эфирными
и гидроксильными группами или с двумя
и тремя гидроксильными группами, если
только это не вицинальные группы. Соединения
с енольными группами обнаруживаются
(индикаторами РеС13) легче, чем соединения
с фенольными группами (связыванием диазониевыми
солями, РеСЬ), карбонильными и карбоксильными
и двумя вицинальными гидроксильными
группами.
Ниже мы приведем примеры
разделения и обнаружения кислородсодержащих
соединений, в которые входят отдельные:
группы.
В пятидесятых годах,
в период бурного развития БХ, был опубликован
ряд статей с описанием методик и систем
растворителей, предназначенных для разделения
белковых гидроли-затов или аминокислот,
полученных из различных физиологических
жидкостей (см. [51, 77]). Эти системы использовались
для разделения сложных смесей аминокислот
и пептидов и смесей аминокислот, с трудом
поддающихся идентификации, например
лейцин, изолейцин. С появлением автоматических
аминокислотных анализаторов [120], а также
новых ионообменни-ков (см. гл. 5) БХ все
реже и реже используют для анализа аминокислот
и пептидов. В настоящее время в лабораториях,
ведущих исследование белков, методом
БХ проводят главным образом окончательную
очистку простых смесей пептидов, полученных
с помощью других методов разделения,
кроме того, БХ служит одним из критериев
однородности вещества (часто в сочетании
с электрофорезом на бумаге), и только
в считанных случаях ее применяют для
идентификации отдельных аминокислот.
Если не требуется
хроматографировать пептиды, то надо с
помощью гидролиза отделить аминокислоты
от пептидов или белков. Чаще всего для
этого применяют кислотный гидролиз, в
результате которого триптофан разлагается
полностью, а цистин, треонин, серии и иногда
тирозин частично. Лучше всего проводить
гидролиз 6 н. соляной кислототe.
Список литературы
:
1. Зеленин К.Н. Газовая
хроматография в медицине // Соросовский
Образовательный Журнал. 1996. № 11. С. 20-25.
2. Кирхнер Ю. Тонкослойная
хроматография. М.: Мир, 1981.
3. Хроматография в
тонких слоях / Под ред. Э. Шталя. М.: Мир,
1965.
4. Евгеньев М.И., Евгеньева
И.И., Москва Н.А., Левинсон Ф.С. 5-Хлор-4,6-динитробензофуразан
как реагент в тонкослойной хроматографии
ароматических аминов // Завод. лаб. 1992.
Т. 58, № 4. С. 11-13.
5. Лабораторное руководство
по хроматографическим и смежным методам.
под ред. О. Микеша пер. с англ., т. 1, М., 1982,
с. 58-151.