Вирусы огурца

   Вирус присутствует во всех тканях, включая пыльцу, и иногда в зародышах. В клетках вирус может вызывать цитологические аномалии, например ячеистость митохондрий, которые также могут быть обнаружены путем микроскопирования.

   Метод включений.

   Вирус образует веретеновидные паракристаллы и включения в виде круглых пластинок. Образование  включений можно вызвать искусственным путем. При обработке клеток эпидермиса и волосков листьев больных растений 1.2н раствором соляной кислоты в них образуются игловидные паракристаллы.

   Химический  метод.

   Метод основан на отличиях в метаболизме  больных и здоровых растений, которые  могут быть обнаружены с помощью  качественных (обычно колориметрических) химических реакций. Для анализа  на ВЗМО зрелый плод (семенник) очищают  от кожуры и растирают в ступке. Из полученной кашицеобразной массы отжимают через двойной слой марли сок и кипятят его в течение одной минуты. Отфильтровывают сок через бумажный фильтр и прибавляют к нему 3%-ный CuSO₄ (на три части сока одну часть сульфата меди). Сок из больных плодов через несколько минут становится желтовато-зеленым (или голубым, если для анализа были взяты незрелые плоды). Сок из здоровых растений будет зеленым.

   Серологическая  диагностика.

   Очистка препаратов.

   Вирус легко выделяется из пораженных системно растений огурца. Существует 2 метода очистки вируса. Первый метод: растения собираются спустя 3 недели после заражения, измельчаются в 0.1М фосфатном буфере, рН 7.0 (2мл на 1 г ткани) и подвергаются 2-3 циклам дифференциального центрифугирования. Адсорбированные пигменты удаляются путем гомогенизации препарата вируса в 0.1М фосфатном буфере, рН 7.0, с равным объемом смеси n-бутанола и хлороформа в течение 2-3 мин. при комнатной температуре. Водный слой, содержащий вирусные частицы, отделяется путем центрифугирования при 900g и проходит еще 2 цикла дифференциального центрифугирования. Осадок растворяется в дистиллированной воде. Второй метод: растения собираются спустя 3-4 недели после заражения, листья вымораживаются в течение нескольких часов, затем измельчаются в 0.05М фосфатном буфере рН 7.6 (4 мл на 1г. ткани), содержащем 0.1% объема тиогликолевой кислоты. Взвесь фильтруется через ткань. Добавляется n-бутанол капельно (9.3мл/100мл. сока), и смесь встряхивается в течение 45 мин. при комнатной температуре. Центрифугируется при 10000g в течение 30 мин.. Вирус осаждается из надосадочной жидкости добавлением 2%-ного NaCl и затем 4%-ного полиэтиленгликоля (m_r=6000), смесь выдерживается 0.5-1 ч. при 4⁰С и центрифугируется в течение 10 мин. при 10000g. Осадок растворяется в дистиллированной воде (1 мл на 25 г. первоначальной ткани), и нерастворимая часть устраняется (5 мин. при 10000g). Добавляют 1-1.5 мл. препарата в колонну (85×1.5 см.) пористых стеклянных бусинок (размер пор 70 нм), и элюируют с 0.04М фосфатным буфером, рН 7.0. Вирус элюирует в пустой объем, хорошо отделяется от лишнего материала и может быть позже концентрирован преципитацией с 2.5 объемами этанола.

   Вирус обладает высокой иммуногеной способностью; антисыворотка, приготовленная путем  одной внутривенной и двух внутримышечных инъекций (с адъювантом), имеет титр 1/4096. При преципитации в пробирках осадок хлопьевидный или нитевидный. Антисыворотка также хорошо реагирует в тестах микропреципитации и иммунодиффузии с использованием свежеприготовленного агарового геля; дает одну главную и иногда одну меньшую полосы преципитации. Очищенные препараты, смешанные с равным объемом глицерола, при хранении при 2⁰С практически не теряют серологической активности по меньшей мере 6 лет.  

    Информационные источники.

 1). Власов, Ларина. Сельскохозяйственная вирусология;

 2). Келдыш, Помазков. Вирусы, вироиды и микоплазмы растений;

 3). Иорданова.  Новое заболевание огурцов – кольцевая пятнистость;

 4). Леонтьева,  Кошелева, Коновалова. Полевая мозаика огурцов;

 5). Медведская. Вирозы тепличных растений;

 а также материалы с сайта www.dpvweb.net .