Контрольная работа по "Вирусологии"

МИНЕСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО  ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

АЛТАЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ  АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ И  ОВД

 

 

 

 

 

 

 

 

КОНТРОЛЬНАЯ РАБОТА ПО ВИРУСОЛОГИИ

 

 

ВЫПОЛНИЛ: Студентка 2 курса 8511 группы

Емелина Олеся Геннадьевна

                                                                        ПРОВЕРИЛ: Барышников Пётр Иванович        

 

 

 

 

 

 

г. Барнаул

2013г.     

Содержание

1. Какова устойчивость вирусов к физическим и химическим факторам? От чего она зависит? (6)
2. Какими путями вирусы могут передаваться от больных животных здоровым? Какими путями вирусы внедряются в организм здоровых животных? Приведите пример(21)
3. В чем заключается принцип и практическое использование РДП в вирусологии?(39)
4. Как осуществляется поддержание вирусных штаммов в лабораториях(пассажи, консервация)?(56)
5. Аденовирусная инфекция КРС(71)
6. Список литературы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1.

Устойчивость вирусов  в теле животных

Образовавшиеся инфекционные вирусные частицы освобождаются  из клеток постепенно или очень быстро. Все чувствительные к эфиру вирусы (гриппа, герпеса и др.) созревают  на периферии клетки и освобождаются  из клетки постепенно по мере созревания. Устойчивые же к эфиру вирусы накапливаются  в клетке и одновременно быстро выделяются в среду.

Устойчивость вирусов  к действию физических, химических факторов и фармакологических препаратов. Действие того или другого агента зависит от расположения вирусных частиц. Если вирионы находятся вне клеток, действие выражено сильнее, если внутри ее — слабее.

Вирусы различных видов  неодинаково устойчивы к кислотам, щелочам, гипо и гипертоническим растворам. Все окислители в той или иной степени инактивируют вирусы, а восстановители способствуют их сохранению. Наилучшим консервирующим веществом для большинства вирусов служит 50%ный раствор глицерина на фосфатном буфере. В этом растворе при 2°С вирусы сохраняют жизнеспособность несколько месяцев.

Антибиотики и сульфаниламиды не оказывают существенного действия на вирусы, за исключением возбудителей лимфогранулемы, орнитоза и трахомы. Эта группа возбудителей занимает промежуточное положение между риккетсиями и вирусами. В последнее время они получили название хламидозоа или бедзониа.

Вирусы чувствительны  к повышенным температурам, большинство  из них инактивируются при 56—60°С в течение 5—30 мин, однако некоторые могут выдерживать нагревание до 80°С.

Все вирусы хорошо сохраняются  при замораживании. Добавление к  вирусу куриного желтка с сахарозой  или глюкозой и замораживание  при низких температурах (минус 79 или  минус 196°С) значительно повышают его  выживаемость.

 

 

2.

Жесткое защитное покрытие кожи, роговой слой, создает эффективное препятствие для инфекции, однако некоторые вирусы проникают через кожу при повреждениях, при подкожных инъекциях или через укус членистоногого.

Кожа систематически травмируется, и образующиеся при этом повреждения позволяют вирусам проникать в восприимчивые клетки более глубоких слоев эпидермиса и дермы. Например, в тех случаях, когда часть мышей была поражена эктромелией, самым обычным опособом передачи инфекции было заражение через царапины, причем вирус попадал на кожу с зараженной подстилки либо с шерсти больных мышей (Феннер, 1948а).

Некоторые небольшие  опухоли, поражающие только кожу, передаются через мелкие царапины (хотя прямые данные об этом получить трудно), а также путем механической передачи членистоногими. Распространенность двух кожных инфекций человека — контагиозного моллюска (Poxvirus) и бородавок [Papillomavirus) —нельзя отнести исключительно за счет передачи членистоногими; оба эти вируса распространяются, вероятно, прямой инокуляцией через мелкие царапины. Экспериментальное внутрикожное введение вируса бородавок, полученного непосредственно из бородавок или пасссированного на клетках почек обезьяны, вызывает образование бородавок после инкубационного периода длительностью от 3 до 12 мес.

Вирус псевдобешенства представляет пример межвидовой передачи через мелкие царапины кожи (Шоуп, 1935b). Псевдобешенство у свиней является высококонтагиозной инфекцией, при которой клинические проявления настолько слабы, что многие вспышки остаются незамеченными и определяются только по серологическим данным.

Крупный рогатый  скот при содержании в одном помещении со свиньями, видимо, заражается носовым секретом свиней через кожные царапины, что вызывает тяжелое заболевание, обычно смертельное, но не передающееся от больных коров животным других видов.

Бешенство обычно передается при укусе зараженным животным (собака, кошка, дикие хищники, летучие мыши), слюна которых содержит вирус. Подобным же образом заражение человека обезьяньим герлеовирусом (вирус В) обычно осуществляется слюной при укусе обезьяны, но может происходить и при втирании вируса через обычные царапины, а также аэрозольным путем (Дэвидсон и Хаммелер, 1960).

Как вирус бешенства, так и вирус В распространяются в организме по нервам и гематогенным путем в центральную нервную систему. Подобно псевдобешенству рогатого скота, эти инфекции являются «тупиковыми», поскольку вирусы не передаются членистоногими и не выделяются человеком в окружающую среду.

Опыты на животных показывают легкость передачи вирусных инфекций инокуляцией, как подкожной, так и другими способами (внутримозговой, интраназальной, внутрибрюшинной). Инокуляция может иметь эпидемиологическое значение в медицине и ветеринарии, и удельный вес этого способа заражения в распространении вирусных болезней в развитых странах возрастает.

Классический пример — гепатит В, передающийся при переливании крови (и сыворотки), а также через контаминированные шприцы и иглы. Недавно были опубликованы сообщения о передаче цитомегаловируса и вируса, вызывающего инфекционный мононуклеоз (вероятно, связанных с лейкоцитами), при переливании крови. Инфекционная анемия лошадей обычно передается от одной лошади к другой при подкожных инъекциях (Дригасс и Ломбард, 1954). Наконец, наиболее «почтенная» из иммунизирующих процедур — противооспенная вакцинация по Дженнеру — осуществляется внутрикожной инокуляцией вируса оспосвакцины.

Пути проникновения  и первичного приживления вирусов  в организме разнообразны и тесно  связаны с механизмом передачи возбудителя  инфекции. В соответствии с особенностями  патогенных свойств каждый вирус  обладает тропизмом и имеет орган-мишень, в клетках которого он лучше всего  размножается. Существуют болезни с  преимущественной локализацией поражений  в органах дыхания, пищеварения, наружных покровах и т. д.

В силу анатомо-физиологических  особенностей, а также поведения  сельскохозяйственных животных (общение, обнюхивание, облизывание и т. п.) основными путями внедрения возбудителей большинства болезней вирусной этиологии  являются желудочно-кишечный и респираторный  тракты. При этом органы пищеварения  и дыхания в патогенезе вирусных болезней могут служить местом непосредственного  развития патологического процесса, местом первичного приживления возбудителя  с последующим проникновением его  в циркулирующие системы или  местом прямого проникновения вируса в циркулирующие системы и  приживления его в регионарных  лимфоузлах.

Вирус бешенства вызывает специфический энцефалит (воспаление головного мозга) у животных и человека. Передаётся со слюной при укусе больным животным. Затем, распространяясь по нервным путям, вирус достигает слюнных желёз и нервных клеток коры головного мозга, гиппокампа, бульбарных центров, и, поражая их, вызывает тяжёлые необратимые нарушения.

 

 

3.

 

Принцип реакции диффузной  преципитации (РДП) в агаре заключается в том, что одноименные специфические антиген и антитело, помещенные на определенном расстоянии друг от друга в агаровом геле, диффундируют и образуют при встрече друг с другом преципитат в виде белых полос. В случае несоответствия антигена и антитела полосы преципитации не появляются. Для воспроизводства феномена диффузной преципитации всегда необходимы следующие ингредиенты: антигены, сыворотки, агаровый гель.

Методика постановки РДП  в геле состоит в том, что в  слое агарового геля делают несколько  углублений (лунок) и в них наливают антигены и сыворотки, так, чтобы  разные компоненты были в соседних лунках. Из лунок антигены и антисыворотки начинают диффундировать в слой геля. Реакция может быть поставлена в чашках Петри или на предметных стеклах во влажной камере. Предварительный учет результатов РДП производят через 8-10ч., основной- через 24ч. И окончательный- через 48-72ч. Высушить и окрасить, что позволяет их сохранять неопределенно долго и улучшает возможность фотографировать полосы преципитации.

Данная реакция характеризуется  простой техникой постановки, быстрым  получением ответа, нетребовательностью  к чистоте компонентов и стерильной работе, минимальной потребностью в  компонентах, пригодностью для работы с любыми растворимыми антигенами и возможностью документирования результата путем фотографирования. К недостаткам следует отнести ее низкую чувствительность.

4.

ПАССАЖ ВИРУСА, проведение микроба (resp. вируса) через организм восприимчивого животного с целью усиления вирулентности; метод впервые предложен Пастером. Животное заражается микробом; затем его убивают или оно гибнет, и из его органов выделяют чистую культуру, вновь заражая ею новое животное и повторяя эту процедуру любое число раз. Можно пассировать также органы, заражая животное культурой микроба и вводя новым животным эмульсию органов зараженного. Чистая культура выделяется только после известного числа пассажей.

Метод размножения  вирусов в культурах клеток: Культура клеток - это клетки многоклеточного  организма, живущие и размножающиеся в искусственных условиях вне  организма (in vitro). Методика культивирования клеток особенно успешно стала развиваться после 40-х годов текущего столетия. Этому способствовали следующие обстоятельства: открытие антибиотиков, предотвращающих бактериальное заражение культур клеток, открытие Хуангом (1943) и Эндерсом (1949) способности вирусов вызывать специфическую деструкцию клеток

(цитопатический эффект) - удобный метод индикации вирусов в культурах клеток, и, наконец, Дульбекко и Фогт (1952) предложили методику трипсинизации тканей и получения однослойных культур клеток. В вирусологической практике применяют следующие культуры клеток: первично-трипсинизированные культуры клеток - клетки, полученные непосредственно из органов или тканей организма, растущие in vitro в один слой. Культуру клеток можно получить практически из любого органа или ткани человека или животного (взрослого или эмбриона). Однако лучше это удается сделать из эмбриональных органов, так как клетки эмбрионов обладают более высокой потенцией роста. Чаще всего для этих целей используют почки, легкие, кожу, тимус, тестикулы эмбрионов или молодых животных. Для получения первичных клеток от здорового животного не позднее 2-3 ч после убоя берут соответствующие органы или ткани, измельчают их на кусочки (1-4 мм) и обрабатывают ферментами: трипсином, панкреатином, коллагеназой и другими (чаще трипсином). Ферменты разрушают межклеточные вещества, полученные при этом отдельные клетки суспендируют в питательной среде и культивируют на внутренней поверхности пробирок или матрасов в термостате при 37 °С. Клетки прикрепляются к стеклу и начинают делиться. В развитии культур клеток различают несколько фаз: адаптации, логарифмического роста, стационарную и старения (гибель клеток). Размножаясь, клетки размещаются на поверхности стекла и при полном покрытии его в один слой контактируют друг с другом и прекращают делиться (контактная ингибиция). На стекле формируется слой толщиной в одну клетку (поэтому эти культуры клеток называют однослойными или монослойными). Монослой сохраняет жизнеспособность в течение 7-21 дней. Для культивирования вирусов используют молодые культуры клеток (как

только сформировался  монослой). Субкультуры. В вирусологической практике часто используют субкультуры, которые получают из первичных клеток, выращенных в матрасах, путем снятия их со стекла раствором версена или трипсина, ресуспендирования в новой питательной среде и пересева на новые матрасы или пробирки. Через 2-3 сут формируется монослой. Практически субкультуру можно получить из всех первичных культур клеток. (Хуже субкультивируются куриные фибробласты.) Субкультуры по чувствительности к вирусам не уступают первичным культурам клеток, кроме того, они более экономичны, и есть возможность выявления контаминации клеток вирусами. Субкультуры получают от 2-5 пассажей (перевивок) и очень редко до 8-10. Последующие пассажи приводят к изменению морфологии клеток и их гибели. Если клеточные культуры прошли более 10 пассажей, они уже на стадии перехода к перевиваемым культурам клеток. Перевиваемые культуры клеток - это клетки, способные к размножению вне организма неопределенно длительное время. В лабораториях их поддерживают путем пересевов из одного сосуда в другой (при условии замены питательной среды). Получают перевиваемые клетки из первичных культур клеток с повышенной активностью роста путем длительных пересевов в определенном режиме культивирования. Обычно работа по получению новых клеточных линий продолжается несколько месяцев. Полагают, что механизм происхождения перевиваемых культур клеток - результат генетической изменчивости клеток или селекции единичных клеток, присутствующих в первичной исходной культуре. Клетки перевиваемых культур имеют одинаковую форму, гетероплоидный набор хромосом (у первичных клеток он диплоидпый), стабильны в условиях

роста in vitro, некоторые из них обладают онкогенной активностью. Последнее свойство ограничивает использование перевиваемых культур клеток для культивирования вирусов при производстве вакцин. Перевиваемые культуры клеток можно получать как из здоровых тканей животных, так и из опухолевых. Перевиваемые клетки имеют преимущества перед первичными: их приготовление значительно проще, экономятся труд и материальные средства; эти культуры заранее можно проверить на наличие латентных вирусов и микрофлоры; клональные линии обеспечивают более стандартные условия для размножения вирусов, чем первичные, представляющие смешанную популяцию клеток. Большинство перевиваемых клеток обладает более широким спектром чувствительности к вирусам, чем соответствующие первичные культуры. Поддерживают перевиваемые клетки путем периодических пересевов. Чаще используют бесцентрифужный метод. Для очередного пересева отбирают 2-3-дневную культуру с хорошим монослоем.

Диплоидные культуры клеток. Это морфологически однородная популяция клеток, стабилизированная  в процессе культивирования in vitro, имеющая ограниченный срок жизни, характеризующаяся в процессе пассирования кариотипом, свойственным исходной ткани, свободная от контаминантов и не обладающая туморагенной активностью при трансплантации хомячкам. Диплоидные культуры клеток, так же как и перевиваемые, получают из первичных культур клеток. Кариотип клеток очень лабилен и при обычных методах культивирования клеток он изменяется в первые дни. Поэтому потребовались специальные методы обработки ткани, питательные среды высокого качества, фетальная сыворотка для длительного поддерживания клеток in vitro в диплоидном состоянии. Диплоидные клетки получают из различных тканей эмбриона человека (легкие, почки, кожно-мышечная ткань, сердце и др.) и животных (почки эмбриона крупного рогатого скота, свиней,