Пециломикоз

      Пециломикоз ( лат. Paecilomycosis) – глубокий системный микоз, при котором в патологический процесс могут вовлекаться кровь, сосуды мелкого и среднего калибра, интерстиций, лимфатические узлы, кожа, слизистая оболочка, внутренние органы и нервная система.

   К настоящему времени остается мало изученным заболеванием, так как частота выделения грибов рода Paecilomyces от больных по общепринятой методике не превышает 1-1,5 %. Как новая нозологическая единица микоза введена Baker в 1971 г. на основании имеющихся сообщений о поражении человека и животных грибами рода Paecilomyces. Повсеместное распространение грибов рода Paecilomyces в почве различных географических зон определяет массовую инфицированность ими населения земного шара. Однако использование рутинных методов выделения грибов из патологического материала от больных затрудняло освещение данного вопроса. На основании выявления диморфизма и особенностей паразитирования тканевых форм грибов рода Paecilomyces А. М. Ахунова в 1991 году разработала новый способ их выделения от больных, повысивший частоту выделения до 44 %. Грибы рода Paecilomyces обладают диморфизмом и являются возбудителем нового вида врожденной хронической персистирующей инфекции крови, контролируемой механизмами неспецифической защиты и специфического иммунитета, состоятельность которых обусловливает фазы носительства или активации пециломикозной инфекции в крови. Клинические проявления пециломикоза полиморфны, что определено генерализованным распространением грибной инфекции, а также типами иммунных реакций, реализующихся в процессе сопротивления организма человека возбудителю. Внутриклеточный цикл паразитирования тканевых форм грибов рода Paecilomyces не позволяет достичь их полной элиминации из организма хозяина. Это значит, что даже после проведенного, полного курса лечения системными антимикотиками сохраняется возможность рецидива инфекции.  

Наиболее часто зафиксированы проявления пециломикоза в форме аллергических заболеваний, в том числе в виде бронхиальной астмы.

 Среди факторов, подавляющих  состоятельность иммунного контроля  и провоцирующих активацию пециломикозной инфекции с развитием клинически выраженного пециломикоза в виде бронхиальной астмы, доминируют острые и хронические вирусные инфекции, стрессовые воздействия, сезонные и возрастные колебания иммунной системы, что является "особенностью бронхиальной астмы при пециломикозе".

   Морфологические структуры гриба Paecilomyces variotii в эксперименте в условиях паразитизма у биологического хозяина. 

Для установления диморфизма и изучения морфологических структур гриба Paecilomyces variotii в условиях паразитизма у биологического хозяина проведено экспериментальное заражение живой системы: культуры клеток эмбриональной почки бычка суспензией клеток мицелия культуры гриба Paecilomyces variotii. Оценку и анализ изменений в системе культуральных клеток после внесения образца суспензии клеток мицелия культуры гриба Paecilomyces variotii проводили через 1, 6, 24 и 48 часов инкубации в термостате при

температуре 37°С. Результаты исследования показали, что уже через 1 час инкубации образца суспензии мицелиальных клеток культуры гриба Paecilomyces variotii отмечалось нарушение монослоя с субтотальным лизисом культуральных клеток. Среди сохранившихся островков монослоя с культуральными клетками в полях зрения виден разрыв мицелиальных клеток с выходом эндоспор в окружающую среду. В других полях зрения на фоне разрушенного монослоя из культуральных клеток наблюдались эндоспоры, развивающиеся в зрелые тканевые формы. Эндоспоры — мелкие округлые образования, размерами 0.5 - 2.0 мкм в диаметре с двухконтурной капсулой.

Через 6 часов инкубации образцов суспензии мицелиальных клеток культуры гриба Paecilomyces variotii на фоне разрушенных клеток монослоя выявлялись округло-овальные образования размерами 4, 10, 16 и 29 мкм в диаметре, имевшие двухконтурную капсулу, внутри которой располагались разное количество — 1, 4, 6 и более — эндоспор, что позволяло обозначить их как сферулы. Наряду с вышеизложенным встречались формы с признаками простого деления за счет перешнуровки (образование перегородки), что указывало на универсальные свойства гриба Paecilomyces variotii при определенных условиях развития переходить в дрожжеподобную форму.

Через 24 и 48 часов наблюдения на покровных стеклах культуральные клетки обнаружены не были. В осадке питательной среды выявлялось большое количество клеточного детрита и округлые образования тканевых форм гриба Paecilomyces variotii. В отдельных сферулах выявлялись поры, через которые эндоспоры выделялись в окружающую среду Таким образом выявлен диморфизм гриба Paecilomyces variotii с образованием разнообразных тканевых форм, а также способность к мицелиальной или дрожжеподобной фазе развития. Образование сферул различных размеров и с неодинаковым содержанием эндоспор может свидетельствовать о трансформации в тканевые формы различных клеток мицелиальных структур гриба P.variotii: конидии, хламидоспоры, аскоспоры. Ускоренный 6-часовой цикл развития возбудителя пециломикоза в крови человека, по-видимому, связан с адаптацией паразита к условиям паразитирования в организме хозяина, так как скопления крупных грибных клеток в просвете сосудов могли бы способствовать развитию тромбов и, как следствие, гибели хозяина.

 СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ПЕЦИЛОМИКОЗА 
Изобретение относится к области медицины, в частности к микологии, инфекционным болезням, гематологии, пульмонологии, дерматологии, терапии, неврологии, аллергологии. Способ экспресс-диагностики пециломикоза включает взятие образца крови (0.02 мл) и помещение его в физиологический раствор (4 мл), подкрашенный генциановым фиолетовым из расчета 10 мг на 100 мл физиологического раствора. После 5-минутного окрашивания содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой и помещают в счетную камеру Горяева. Выявляют окрашенные сферулы гриба и производят их количественное определение в 100 больших квадратах. Изобретение обеспечивает быструю диагностику заболевания пециломикоза. 
 
 
 
 
     ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 
Изобретение относится к медицине, в частности к микологии, инфекционным болезням, гематологии, пульмонологии, дерматологии, терапии, неврологии, аллергологии. Может быть использовано при постановке диагноза пециломикоза, сепсиса, анемии, атипичной пневмонии, бронхиальной астмы, энцефаломиелита, пузырных дерматозов и зудящих дерматозов. 
 
В настоящее время многие заболевания, сопровождающиеся аллергическими проявлениями, относят к псевдоаллергическим, поскольку у них аллергологическое обследование с известной группой аллергенов показывает отрицательные результаты (Г.И.Дрынов, 2004) [1]. Нами выявлен новый вид хронической инфекции крови тканевыми формами условно-патогенных грибов рода Paecilomyces, активация которых под влиянием ОРВИ или др. инфекций, или различных стрессовых ситуаций, стимулирует выработку специфических IgE- и/или IgG-антител с развитием аллергических симптомов и, в том числе, бронхиальной астмы. 
 
Наблюдаемая клиническая картина инфекционного процесса, вслед за симптомами которого через 7-14 дней развиваются клинические проявления кожного и/или респираторного аллергоза является типичной для клинически выраженного пециломикоза и зачастую, по жизненным показаниям требует ускоренной диагностики и оказания неотложной помощи. 
 
Грибы рода Paecilomyces широко распространены в природе и встречаются во всех странах, что определяет массовую инфицированность ими населения земного шара. Они обладают диморфизмом и встречаются в двух формах - культуральной и тканевой (фиг.1, 2). Культуральная форма представлена мицелием, а тканевая - сферулой. Зрелая сферула грибов рода Paecilomyces - округлые или овальные тельца с двухконтурной капсулой, внутри которой заключены эндоспоры. Основная масса зрелых сферул гриба рода Paecilomyces имеет размеры в пределах 4-5 мкм и 10-11 мкм в диаметре и только отдельные из них достигают размеры 20-21 мкм и 28-29 мкм в диаметре. Соответственно этому основная масса эндоспор имеет размеры от 0,3-0,5 мкм в диаметре, а отдельные из них - 1,0-1,5 мкм в диаметре. Порядок расположения эндоспор в зрелой сферуле специфичен и имеет характерный узорчатый рисунок для каждого вида. Развитие эндоспоры в зрелую сферулу осуществляется главным образом внутриклеточно, по-видимому, используя сложные белки ядер клеток как основной источник пластического материала, необходимого для их роста и развития. При этом происходит гибель клетки с распадом ее клеточной структуры и выходом зрелых сферул в окружающую среду. 
 
Пециломикоз в форме сепсиса был впервые описан у человека Uys и соавт. в 1963 г. 
 
В последующие годы были описаны другие наблюдения, которые характеризуют его как системное заболевание, при котором наряду с поражениями кожных и слизистых покровов описаны поражения различных внутренних органов. 
 
Известен способ культурального выделения грибов рода Paecilomyces из патологического материала больных (A.M.Ахунова, патент №1775047, выданный Государственным комитетом по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР, 1990 г.),когда предварительная инкубация в гепаринизированной среде 199 повысила чувствительность метода культурального выделения грибов рода Paecilomyces от 0-1% до 44-73%. Однако вся процедура выделения гриба охватывает период от 5 до 14 дней, что затрудняет своевременное оказание неотложной помощи. В то же время в связи с условно-патогенными свойствами грибов рода Paecilomyces при постановке диагноза пециломикоз возникла необходимость количественного учета микрофлоры. 
 
Цель настоящей работы - разработка способа экспресс-диагностики пециломикоза путем выявления морфологических структур гриба рода Paecilomyces в крови и разграничения пецилоносительства от форм клинического проявления пециломикозной инфекции путем прямого количественного подсчета зрелых сферул гриба. 
 
   Задачей изобретения является ускорение метода диагностики пециломикоза. 
 
Задача решается путем помещения образца крови в физиологический раствор, подкрашенный генциановым фиолетовым из расчета 10 мг красителя на 100 мл физиологического раствора для прокрашивания полисахаридных компонентов капсул сферул гриба в багрово-фиолетовый цвет.

Задача осуществляется: 
 
1-й этап исследования: После обработки мякоти безымянного пальца спиртом у больного производили забор крови в количестве 0,02 мл и помещали в пробирку, содержащую 4 мл стерильного 0,9% физиологического раствора, подкрашенного генциановым фиолетовым и оставляли для прокрашивания в течение 5 минут при комнатной температуре. После чего содержимое пробирки перемешивали стеклянной палочкой и вносили в камеру Горяева. Счетную камеру Горяева оставляли в горизонтальном положении на 1 мин для осаждения сферул гриба и эритроцитов. Для лучшего контрастирования затемняли поле зрения, опуская конденсор и прикрывая диафрагму. Прямой количественный подсчет зрелых сферул гриба, окрашенных в багрово-фиолетовый цвет, производили по всей сетке в 100 больших квадратах, начиная с левого верхнего угла сетки. Считали сферулы при увеличении окуляр 10, объектив 15. В случае затруднения их распознавания использовали увеличение объектив 20, окуляр 15. Подсчету подлежали зрелые сферулы гриба размерами от 4-5 мкм до 28-29 мкм в диаметре. Меньшие формы недостаточно ясны для распознавания и нами не учитывались. Расчет зрелых сферул гриба производили исходя из разведения крови (200), числа сосчитанных квадратов (100) и объема большого квадрата (1/250) по формуле: 
 
 
 
где Х - число зрелых сферул гриба 1 мкл крови; 
 
С - число зрелых сферул гриба в 100 больших квадратах. 
 
Новым в предложенном техническом решении для постановки диагноза пециломикоза является: 
 
1 - специфическая окраска клеток гриба генциановым фиолетовым, что отличает их от эритроцитов. 
 
2 - количественный подсчет окрашенных зрелых сферул гриба исходя из объема квадратов и разведения крови в счетной камере Горяева.

Положительный эффект предлагаемого способа экспресс-диагностики пециломикоза заключается в том, что путем помещения образца крови в стерильный физиологический раствор, подкрашенный генциановым фиолетовым из расчета 10 мг на 100 мл раствора, происходит окраска полисахаридного компонента оболочек сферул гриба в багрово-фиолетовый цвет, что выделяет их среди эритроцитов. Выявление сферул гриба и их прямой подсчет в камере Горяева, исходя из разведения крови (200), числа сосчитанных квадратов (100) и объема большого квадрата (1/250), что позволяет дифференцировать пецилоносительство от клинически выраженного пециломикоза и своевременно оказать этиотропное и патогенетическое лечение.