Влияние некоторых адаптогенов на структурно-функциональные свойства эритроцитов периферической крови крыс
Автор работы: Пользователь скрыл имя, 19 Января 2016 в 12:03, дипломная работа
Описание работы
Успехи современной биологии позволяют утверждать, что любая патоло-
гия начинается с различных нарушений мембранного аппарата клетки, с повы-
шения ее проницаемости. Функциональные изменения в клетке являются вто-
ричными, они всегда имеют в основе изменения соответствующей структуры.
Главное направление современной медицины - проблема саморегуляции орга-
низма, восстановление утраченных функций и, в связи с этим на первое место
выходят вопросы профилактики болезней. Один из путей повышения рези-
стентности организма и эффективности саморегуляции является применение
адаптогенных препаратов, помогающих на молекулярно-клеточном уровне вос-
становить или не допустить возникновения структурно-функциональных нару-
шений клеток и тканей
Содержание работы
ВВЕДЕНИЕ 5
Глава 1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1. Строение и функции эритроцитарной мембраны 6
1.2. Механизм гемолиза эритроцитов 8
1.3. Фармако-токсикологическая оценка некоторых адаптогенов. 11
1.4. Антиоксидантная система защиты организма 15
Глава 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 20
2.1. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ 20
2.2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 20
2.2.1. Методика регистрации гемолитических эритрограмм 20
2.2.2. Определение активности каталазы 24
.2.3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 25
2.3.1. Характеристика кинетики гемолиза эритроцитов крови крыс при
применении некоторых адаптогенов
25
2.3.2. Влияние некоторых адаптогенных препаратов на активность ката-
лазы.
30
ВЫВОДЫ 32
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
Файлы: 1 файл
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕБЮДЖЕТНОЕ
ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
ВЫСШЕГОПРОФЕССИОНАЛЬНОГООБРАЗОВАНИЯ
“ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ”
Биолого-почвенный факультет
Кафедра физиологии человека и животных
Влияние некоторых адаптогенов на структурно-функциональные
свойства эритроцитов периферической крови крыс
Бакалаврская работа
Направление 020400 Биология
Профиль Физиология
Допущено к защите в ГЭК ___.___.20___
Зав. кафедрой
проф., д.б.н. Г.А. Вашанов
Обучающийся
Е. Б. Бочарова
Руководитель
асс., к.б.н. А.В. Мартынова
доц., к.б.н. В.Ю. Сулин
Воронеж 2015
2
РЕФЕРАТ
УДК 542.943:612.1:796.012.12
Бочарова Екатерина Борисовна. Влияние некоторых адаптогенов на структур-
но-функциональные свойства эритроцитов периферической крови крыс. Бака-
лаврская работа. ВГУ. Воронеж. 2015. 37 с.,7 рисунков, 55 использованных ис-
точников.
Ключевые
слова:
КИСЛОТНЫЙ
ГЕМОЛИЗ,
АДАПТОГЕНЫ,
ОСМОТИЧЕСКИЙ
ГЕМОЛИЗ,
РЕЗИСТЕНТНОСТЬ,
ЭРИТРОЦИТЫ,
СВОБОДНЫЕ РАДИКАЛЫ, АНТИОКСИДАНТНАЯ СИСТЕМА ЗАЩИТЫ.
По активности каталазы и параметрам осмотических и кислотных эритро-
грамм изучали структурно-функциональные свойства эритроцитов перифери-
ческой крови крыс, получавших некоторые адаптогенные препараты: аскору-
тин, водный экстракт прополиса, апилак. Установлено, что 3-х месячный перо-
ральный прием аскорутина повышал каталазную активность и снижал осмоти-
ческую и кислотную резистентность эритроцитов крови крыс. Эй-пи-ви и апи-
лак, напротив, снижали активность каталазы эритроцитов и усиливали рези-
стентность эритроцитарной мембраны к гипоосмотическим условиям и дейст-
вию кислотного гемолитика.
Автор работы
Е. Б. Бочарова
Руководители
А. В. Мартынова
В.Ю. Сулин
3
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
5
Глава 1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
6
1.1. Строение и функции эритроцитарной мембраны
6
1.2. Механизм гемолиза эритроцитов
8
1.3. Фармако-токсикологическая оценка некоторых адаптогенов.
11
1.4. Антиоксидантная система защиты организма
15
Глава 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
20
2.1. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
20
2.2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
20
2.2.1. Методика регистрации гемолитических эритрограмм
20
2.2.2. Определение активности каталазы
24
.2.3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
25
2.3.1. Характеристика кинетики гемолиза эритроцитов крови крыс при
применении некоторых адаптогенов
25
2.3.2. Влияние некоторых адаптогенных препаратов на активность ката-
лазы.
30
ВЫВОДЫ
32
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
33
4
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ,
ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ
t
лат
- время латентного периода гемолиза (с);
G
сф
– относительное количество сфероцитов (%);
G
120
– относительное количество гемолизированных клеток за 120 с инкубации
(%);
Gср – среднее относительное количество гемолизированных клеток за 12 мин.
инкубации (%);
Gmax – максимальное относительное количество гемолизированных клеток за
период инкубации (%);
АО – антиоксиданты
АОС (АОЗ) – антиоксидантная система защиты
АОА – антиокислительная активность
АФК – активные формы кислорода
СРО – свободнорадикальное окисление
5
ВВЕДЕНИЕ
Успехи современной биологии позволяют утверждать, что любая патоло-
гия начинается с различных нарушений мембранного аппарата клетки, с повы-
шения ее проницаемости. Функциональные изменения в клетке являются вто-
ричными, они всегда имеют в основе изменения соответствующей структуры.
Главное направление современной медицины - проблема саморегуляции орга-
низма, восстановление утраченных функций и, в связи с этим на первое место
выходят вопросы профилактики болезней. Один из путей повышения рези-
стентности организма и эффективности саморегуляции является применение
адаптогенных препаратов, помогающих на молекулярно-клеточном уровне вос-
становить или не допустить возникновения структурно-функциональных нару-
шений клеток и тканей.
Кровь, как особая ткань, адекватно отражает неспецифическую рези-
стентность организма благодаря своей реактивности, направленной на сохране-
ние постоянства внутренней среды организма. Оценку резистентных свойств
эритроцитов давно используют при изучении адаптационных и патологических
процессов, однако, многие кинетические параметры кислотного гемолиза эрит-
роцитов лабораторных животных в условиях применения некоторых адапто-
генных препаратов остаются неизученными.
Целью данной работы являлось изучение влияния адаптогенных препа-
ратов на резистентность эритроцитарных мембран и состояние ферментатив-
ного звена антиоксидантной защиты.
Для осуществления данной цели были поставлены следующие задачи:
1. По параметрам гипоосмотических и кислотных эритрограмм изучить
влияние некоторых адаптогенов на структурно-функциональные свойства эрит-
роцитов крови крыс.
2. Оценить состояние ферментативного звена антиоксидантной системы
по активности каталазы.
6
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Строение и функции эритроцитарной мембраны
Эритроцит обладает развитым мембранным комплексом и совершенным
рецепторным аппаратом [8,11,19,37,55]. Мембрана служит барьером проницае-
мости с повышенной степенью избирательности, обеспечивая таким образом
поддержание клеточного гомеостаза в условиях больших различий химическо-
го состава цитоплазмы клеток и среды [19,55,40]. Перенос веществ через мем-
брану совершается в зависимости от их химических свойств различными спо-
собами: диффузией, путем проникновения через липидные участки, либо взаи-
модействуя с встроенными в мембрану белками - переносчиками [18,28,37].
Мембрана эритроцитов отражает особенности биохимического строения
мембран различных тканей, а именно представляет пластичную молекулярную
мозаику, состоящую из белков, липо- и гликопротеинов и, возможно, чисто ли-
пидных участков[36]. В липидном бислое содержатся: холестерин, фосфоти-
дилхолин, сфингомиелин, цереброзиды и другие липиды [5]. Липиды в мем-
бране эритроцита находятся исключительно в виде бислоя. В эритроците чело-
века таких липидов не менее 79%. Существует как трансмембранная, так и пла-
нарная гетерогенность их распределения. Трансмембранная гетерогенность
обуславливается тем, что аминофосфолипиды расположены в цитоплазматиче-
ской половине бислоя, а остальные фосфолипиды в наружном. Планарная гете-
рогенность выражается в том, что в биологических мембранах присутствуют
белки, с которыми липиды могут взаимодействовать [5,18].
Преобладающий по весовым параметрам холестерол своими гидроксиль-
ными группами примыкает к полярным головкам фосфолипидных молекул и
является фактором, определяющим текучесть мембран и механическую проч-
ность бислоя [52].
Белки в эритроцитарной мембране расположены неравномерно. Основная
часть мембранных белков располагается на внутренней стороне мембраны и
7
образует сеть филаментов, которая служит для поддержания двояковогнутой
формы эритроцита. К таким белкам относятся: спектрин, гликофорин, катали-
тический белок – «band 3-гликопротеин», являющийся и интегральным белком
мембраны, участвующим в транспорте ионов. Поверхностный цитоскелет эрит-
роцита включает такие белки, как синдеин, анкирин, «band-3», «band- 4.1»,
«band-2.1» [36,39]. Кроме того, гликофорин и белок полосы 3 являются транс-
мембранными белками. Последний формирует ионные каналы [5,7,27].
Углеводная составляющая эритроцитарных мембран представлена в виде
олигосахаридных цепей, ковалентно присоединенных к белкам и в меньшей
степени к липидам и располагающихся на стороне мембраны, контактирующей
с цитоплазмой. Функция их заключается в стабилизации пространственной
структуры гликопротеина [23,32].
Фактор стабильности липидного бислоя определяется липидными пора-
ми. Эти поры образуются в местах дефектов жидкокристаллической структуры
липидного бислоя. Если липидная пора не превышает некоторый критический
размер, то структура сохраняется. Минимальные размеры липидных пор могут
стать сравнимыми с размерами избирательных белковых каналов, регулирую-
щих в норме ионную проницаемость клеточных мембран [3,55].
Фактор целостности мембраны определяется биохимическими процесса-
ми. При рассмотрении энзимов основного энергетического процесса в эритро-
ците – гликолиза – в первую очередь, выделяют каталазу и глюкозо-6-
фосфатдегидрогеназу. Защитная роль каталазы заключается в предотвращении
окисления гемоглобина до метгемоглобина, а также предохранении гемоглоби-
на от расщепления под действием перекиси водорода. Сходным эффектом об-
ладает глутатионпероксидаза. Эритроциты, лишенные этих ферментов, стано-
вятся весьма чувствительными к действию радиации [22,38,50]. Глюкоза-6-
фосфатдегидрогеназа катализирует реакцию образования НАДФ(Н); последний
в свою очередь способствует функционированию глутатионредуктазы, которая
регулирует уровень восстановленного глутатиона. Глутатион необходим для
нормального протекания реакции гликолиза. Система глутатиона рассматрива-
8
ется как буферная, защищающая эритроциты от деструктивного действия окис-
лителей. Нарушение синтеза глутатиона, увеличение его распада, а также на-
рушение систем регулирования его уровня приводит к гемолизу [2].
1.2. Механизм гемолиза эритроцитов
Нормальный эритроцит обладает резистентностью, т.е. способностью до
определенного предела противостоять действию осмотических, механических,
химических, температурных влияний. Резистентность крови зависит от возрас-
та форменных элементов и уменьшается по мере их старения. Гемолизом назы-
вается процесс разрушения мембран эритроцитов, сопровождающийся выходом
гемоглобина в плазму крови [6].
В зависимости от природы разрушающего агента принято различать ос-
мотический гемолиз (разрушение эритроцитов в гипотонических растворах),
механический (разрушение вне организма по воздействием сильных механиче-
ских воздействий), химический (разрушение эритроцитов под влиянием хими-
ческих соединений: кислот, щелочей, солей и т.д.), температурный (под влия-
нием температур, отклоняющихся от оптимального диапазона) [6].
Считают, что гемолитическая устойчивость эритроцитов определяется
тремя факторами: возрастом клеток, начальной величиной их стойкости, меха-
ническим воздействием в течение жизни в кровяном русле. Вследствие своей
неоднородности эритроциты вступают в процесс гемолиза поочерёдно. Наи-
большей резистентностью обладают молодые эритроциты, наименьшей ста-
рые [6]
Самопроизвольный распад эритроцитов (аутогемолиз) является результа-
том старения дискоцитов, нарушения метаболических процессов внутри клетки
или изменения состава мембранных липидов. В норме процесс аутогемолиза
может происходить при деструкции белков, ферментативных систем и др., что
приводит к повышению онкотического давления, а при накоплении продуктов
гликолиза (закисление среды) повышается осмотическое давление. Совокуп-
9
ность отмеченных процессов лежит в основе аутогемолиза, доля которого в
норме составляет 2 % [13].
Соотношение содержания белков в эритроцитах выше, а низкомолеку-
лярных веществ - ниже, чем в плазме. Осмотическое давление, создаваемое вы-
сокой внутриклеточной концентрацией белков, в значительной степени ком-
пенсируется малой концентрацией низкомолекулярных веществ, и поэтому ос-
мотическое давление в эритроцитах лишь немногим выше, чем в плазме: вели-
чина его как раз достаточна для обеспечения нормального тургора этих клеток.
Мембраны эритроцитов обладают избирательной проницаемостью, при угнете-
нии активного транспорта ионов снижается их трансмембранный концентраци-
онный градиент. Высокое внутриклеточное содержание белков, которое при
этом остаётся постоянным, перестаёт компенсироваться, и осмотическое давле-
ние в эритроците возрастает. В результате вода начинает поступать в эритроцит
[13].
Гемолиз наступает, если объём эритроцита превышает так называемый
"критический гемолитический объём". Чем больше этот критический объём по
сравнению с реальными объёмами нормального эритроцита, тем выше его ос-
мотическая резистентность [12,13]. Согласно коллоидно-осмотической теории
гемолиза вне и внутри интактного эритроцита существует равенство молярных
концентраций [12,13]. В результате нарушения этого равновесия экстрацеллю-
лярная вода, поступая внутрь, начинает растягивать оболочку эритроцита, пре-
вращая его из нормальной формы в сферическую -эритроцит превращается в
сфероцит. Конечной стадией сфероцитоза является разрушение мембраны сфе-
роцита - эритроцита, достигшего своего критического объема (146 % от нор-
мы). С точки зрения этой теории наиболее стойкими являются те эритроциты,
форма которых далека от сферической. Гемолитический объем эритроцита рас-
сматривают как максимальный, он отмечается в том случае, когда мембрана
клетки становится проницаемой для молекул гемоглобина и осуществляется
последующий выход его в окружающую среду [13]. Дополнения к теории Пон-
дера позволили объяснить механизм действия многих гемолитиков. Было пока-
10
зано, что осмотический механизм гемолиза является конечным этапом химиче-
ского гемолиза.
Согласно современным взглядам, эффект действия многих гемолитиче-
ских агентов складывается, по крайней мере, из нескольких этапов.
1. Любой гемолитик перед проникновением в клетку должен вступить в
контакт с мембраной. Последующее действие будет зависеть от того, прони-
цаема ли мембрана для гемолитика или нет. В первом случае гемолитик легко
проникает внутрь, во втором случае проникновение идет с повреждением мем-
браны.
2. Проникнув внутрь эритроцита, гемолитик, действует на внутреннюю
цитоплазматическую структуру эритроцита (в основном на структурную упо-
рядоченность молекул связанного гемоглобина) и индуцирует процесс перехо-
да связанных макромолекулярных комплексов в свободное растворенное в ци-
топлазме состояние. В результате этого мелкие освобожденные молекулы вы-
ходят наружу, крупные и липофильные молекулы остаются в клетке, так как
мембрана для них непроницаема [12]. Повышение молярной концентрации сво-
бодных белков и обусловленный этим процессом приток воды внутрь эритро-
цита вызывает его сферуляцию, и последующий этап гемолиза протекает по
осмотическому типу.
3. При достижении критического объема происходит разрыв оболочки
эритроцита, что сопровождается выходом гемоглобина наружу, то есть собст-
венно гемолизом.
Перечисленные выше этапы последовательного разрушения структуры
эритроцита характеризуют обобщенную схему процесса гемолиза.
Осмотический тип гемолиза не сопровождается химическими изменения-
ми состава эритроцита, сохраняется также его электрические свойства. Так как
осмотический гемолиз вызывает только частичный выход гемоглобина, то из
этого следует, что часть гемоглобина находится в связанной со стромой форме
в виде гемолипостроматинового комплекса (соединение гемоглобина с липида-
ми и холестерином). Реализация освобождения связанной фракции осуществля-
11
ется на стадии химического гемоглобинолиза, проходящей при действии по-
верхностно-активных веществ [6].
При химическом гемоглобинолизе происходит выход связанного гемо-
глобина вследствие распада гемолипостроматинового комплекса, в котором
липиды (стерины) связывают гемоглобин и строматин. В липостроматиновом
комплексе основная часть стеринов и фосфолипидов связана лабильно, в то
время как в липогемоглобиновом комплексе количество прочно связанных сте-
ринов и фосфолипидов преобладает над лабильно связанными липидами.
Предполагается, что основная роль в процессе гемолиза принадлежит липост-
роматиновому комплексу [34].
На стадии химического гемоглобинолиза происходит нарушение физико-
химических свойств эритроцитарных клеток, обнаруженных методом исследо-
вания электропроводности. Все перечисленные выше стадии протекают без на-
рушения целостности (морфологической) эритроцита [6].
Предпоследняя стадия гемолиза эритроцитов - стоматопороз характери-
зуется их высокой электропроводностью при сохранении морфологической це-
лостности клеток. Эта стадия наступает, в частности, при действии на эритро-
циты более концентрированного раствора сапонина [10].
Заключительная стадия гемолиза - строматолиз, т.е. полная деградация
клеточных структур, наступает при действии холево-, дезоксихолево-, олеино-
вокислого натрия и других гемолитиков [6].
1.3. Фармако-токсикологическая оценка некоторых адаптогенов
Аскорутин – это комплексный лекарственный препарат, в состав которого
входят аскорбиновая кислота (витамин С) и рутин (витамин Р). 1 таблетка со-
держит кислоты аскорбиновой кислоты (витамин С) 0,05г, рутина (витамин Р)
0,05г. Вспомогательные вещества: сахар, крахмал картофельный, кальция стеа-
рат, тальк [15].
12
Аскорбиновая кислота (витамин С) – низкомолекулярный водораствори-
мый антиоксидант С6Н8О6. Синтезируется растениями из различных гексоз
(глюкозы, галактозы) и большинством животных (из галактозы). Промышлен-
ный способ получения – путем дегидрирования глюкозы. Аскорбиновая кисло-
та в качестве витамина С (и лекарственного средства) представлена одним изо-
мером, L – аскорбиновой кислотой. Наличие в структуре ее молекул двух фе-
нольных групп позволяет ей участвовать в окислительно-восстановительных
процессах, выступая в качестве донора и акцептора водорода, а полярные и не-
полярные группировки проявляют тесное функциональное взаимодействие не
только с низкомолекулярными тиолами, но и липидными антиоксидантами,
усиливая дейтвия последних и препятствуют протеканию ПОЛ. Регулирует
транспорт водорода во многих биохимических реакциях, улучшает использова-
ние глюкозы в цикле трикарбоновых кислот.
Под действием ОН и ОCl витамин С окисляется, тем самым защищает
клетку от губительного действия АФК [54]. Витамин С сам нейтрализует су-
пероксидный радикал до перекиси водорода. Восстанавливает убихинон и ви-
тамин Е. Стимулирует синтез интерферона, следовательно, участвует в имму-
номодулировании. Переводит трёхвалентное железо в двухвалентное, тем са-
мым способствует его всасыванию.
Известен в двух формах, он может быть как прооксидантом (восстанавли-
вать железо, усиливающее свободнорадикальные реакции), так и антиоксидан-
том. Антиоксидантные эффекты сильнее проявляются при больших дозах, а
прооксидантные – при малых [17]. Аскорбиновая кислота регулирует сверты-
ваемость крови и проницательность капилляров. Защищает липопротеины низ-
кой плотности и другие липиды от окислительного повреждения, захватывая
свободные радикалы[51]. Минимальная потребность взрослого человека в ви-
тамине С 50-100 мг/сутки. Для медицинских целей аскорбиновую кислоту по-
лучают синтетическим путем [29].
Рутин (витамин Р) – это растительные биофлавоноиды и полифенолы.
Растительные биофлавоноиды, представляющие собой группу биологически
13
активных веществ (катехины, кварцетин, цитрин, гесперидин, эридиктиол, циа-
нидин). Соединения данной группы содержат ядро бензапирона, соединенное с
гидроксиламифенолов. Последние могут быть метилированы и соединены с
различными остатками сахаров (рамнозы, глюкозы, и т.д.). Большинство из по-
добных веществ водорастворимо, но имеются и жирорастворимые формы [15].
Получают рутин из цветочных бутонов софоры японской, в настоящее время
является основным источником его получения. Способы основаны на водной,
спиртовой или водно-спиртовой экстракции высушенного сырья цветочных бу-
тонов последующим осаждением рутина и очистки его перекристаллизацией.
Содержание рутина в бутонах софоры японской составляет 13-30% что являет-
ся самым высоким из всех известных растительных источников, содержащих
рутин. Альтернативным источником получения рутина, не имеющим в настоя-
щее время промышленного использования, может выступать гречиха и амарант,
содержание рутина в которой составляет 0,6-6% [15].
Биофлавоноиды и полифенолы – мощные антиоксиданты, реактивизи-
рующие сульфгидрильные соединения и витамин С. Полифенолы действуют
только в присутствии витамина С. Витамин Р обладает капилляроукрепляющим
эффектом. Снижает скорость окисления ЛПОНП, уменьшает активность гиалу-
ронидазы, предотвращает переход адреналина в токсичный аденохром. Мини-
мальная суточная потребность в витамине Р составляет 50-100 мг/сутки [17].
Апилак — это общетонизирующий препарат, созданный на основе одно-
именного продукта пчеловодства. В переводе с латинского apis означает пчела,
а lac — молоко, поэтому большинство людей пользуются не научным, а народ-
ным названием препарата - маточное молочко пчел. В природе это вещество
предназначено для питания личинки пчеломатки. В ходе многолетних исследо-
ваний было установлено, что маточное молочко ускоряет восстановление орга-
низма после тяжелых заболеваний или в результате длительного истощения.
Согласно многочисленным отзывам Апилак мягко стимулирует аппетит, повы-
шает тонус и защитные функции организма [35].
14
Препарат создан на основе маточного молочка — секрета, который выра-
батывают аллотрофические железы рабочих пчел. В состав секрета входят ви-
тамины группы В, фолиевая кислота, 23 аминокислоты, в том числе незамени-
мые, макро- и микроэлементы а также биологические вещества, стимулирую-
щие клеточный обмен. Апилак выпускается в форме сублингвальных таблеток.
Препарат содержит высушенное маточное молочко, а также вспомогательные
вещества, в том числе моногидрат лактозы, тальк, стеарат кальция и карто-
фельный крахмал [35].
Препарат рекомендуется как общеукрепляющее средство после перене-
сенных заболеваний и невротических расстройств. Отзывы об Апилаке свиде-
тельствуют, что препарат стимулирует обменные процессы на клеточном уров-
не, оказывает тонизирующее воздействие на организм, ускоряет регенерацию и
обновление тканей, стимулирует защитные функции организма и является при-
родным антисептиком.
Первые научные исследования природного апилака проводились в сере-
дине 50-х годов ХХ века. Оказалось, что маточное молочко пчел благотворно
влияет на работу желез внутренней секреции, стимулирует пищеварение, кро-
ветворение и метаболизм. Оно одинаково полезно и при недоборе массы тела и
при потере аппетита, при восстановлении после физических и психических на-
грузок, отчего заслужил популярность в спортивной медицине. Апилак активно
применяется в народной медицине при простудных и вирусных заболеваниях,
при синдроме хронической усталости и как укрепляющее средство для пожи-
лых людей. В официальной медицине инструкция к Апилаку предлагает куда
более узкий спектр применения. Сегодня препарат рекомендуется в составе
восстановительного лечения после перенесенных заболеваний, при расстрой-
стве питания и отсутствии аппетита, как вспомогательное средство при лечении
невротических расстройств, при пониженном давлении. Хорошие отзывы Апи-
лак заслужил как препарат для поддержки лактации.
Эй-Пи-Ви в составе имеет прополис с артепиллином С на шунгированной
бидистилированной воде.
15
По данным научных исследований, минерал шунгит обладает уникальной
способностью придавать пропущенной через него жидкости целебные свойства.
Вода, пропущенная через шунгит, меняет свою полевую структуру и приобре-
тает качества «живой воды», способствующей профилактике многочисленных
заболеваний организма и активному долголетию [35].
Основным активным компонентом прополиса, по данным японских ис-
следователей, является артепиллин С, который приобретает свои биологически
активные свойства при экстракции в шунгированной бидистиллированной воде.
«Эй-Пи-Ви» обладает противомикробным действием, подавляя рост и
развитие микобактерий туберкулеза, оказывает выраженное бактерицидное
действие на грамположительные, грамотрицательные бактерии и грибы. Ак-
тивным компонентом прополиса, оказывающим бактерицидное и бактериоста-
тическое действие, является 10-окси-2-деценовая кислота и другие деценовые
кислоты, которые хорошо извлекаются при водной экстракции. Также обладает
свойством повышать устойчивость организма к микробным и вирусным возбу-
дителям в результате стимуляции гипофизарно-надпочечниковой системы, что
позволяет использовать его в качестве стимулятора специфических и неспеци-
фических факторов иммунитета и как пролонгатор антимикробной активности
антибиотиков. Присутствует способность к обезвреживанию токсинов, что
имеет существенное значение при инфекционных заболеваниях, сопровож-
дающимся интоксикацией. Способен повышать остроту зрения, обладает выра-
женным обезболивающим и мощным противоопухолевым действием [35].
1.4. Антиоксидантная система защиты организма
Живая клетка выработала целую систему защиты от повреждения сво-
бодными радикалами. Вещества, тормозящие реакции с участием свободных
радикалов локализуются как в водной среде, так и в липидной фазе клеточных
структур [9].
16
Человеку, как и всякому многоклеточному организму, приходиться бо-
роться с микробами, случайно попавшими внутрь его тела в кровь. Эту борьбу
ведут специализированные клетки – фагоциты, к которым относятся грануло-
циты и моноциты крови, а также тканевые клетки – макрофаги. Все эти клетки,
соприкасаясь с поверхностью клеток бактерий, начинают энергично выделять
свободные радикалы в результате переноса электрона от НАДФН-оксидазного
ферментного комплекса, встроенного в мембраны фагоцита, на растворенный
молекулярный кислород. При этом каждая молекула НАДФН, окисляясь, отда-
ет два электрона в цепь переноса электронов, и каждый из этих электронов
присоединяется к молекуле кислорода, в результате чего образуется анион-
радикал (супероксид). Супероксид-радикалы, как мы увидим позже, могут на-
нести вред, как самим фагоцитам, так и другим клеткам крови и, разумеется,
микробам, вызвавшим активацию макрофага. Естественно, что все эти клетки
стараются избавиться от супероксид-радикалов, для чего они вырабатывают
ферменты, называемые супероксиддисмутазами (СОД). Различаясь по строе-
нию активного центра и структуре полипептидной цепи, все СОД катализирует
одну и ту же реакцию дисмутации супероксидного радикала. При этом супер-
оксид превращается в кислород и пероксидводорода. Судьба последнего может
быть разной [9].
В нормальных условиях процесс перекисного окисления липидов нахо-
дится под строгим контролем, ферментативных и неферментативных систем
клетки, отчего скорость его невелика. Принято делить химические соединения
и физические воздействия, влияющие на скорость перекисного окисления ли-
пидов, на прооксиданты (усиливают процессы перекисного окисления) и анти-
оксиданты (тормозят перекисное окисление липидов). К прооксидантам в жи-
вой клетке относятся высокие концентрации кислорода (например, при дли-
тельной гипербарической оксигенации больного), ферментные системы, гене-
рирующие супероксидные радикалы (например, ксантиноксидаза, ферменты
плазматической мембраны фагоцитов и др.) [9].
17
Антиоксидантная система (АОС) включает: энзиматические перехватчи-
ки, такие как супероксиддисмутазу (СОД), дисмутирующую O до , каталазу и
глутатионпероксидазу (ГПО), которые конвертируют до воды. ГПО и глутати-
он-S-трансфераза (ГSТ) участвуют в детоксикации гидроперок-сидов жирных
кислот; восстановленный глутатион (ГSН), аскорбат, урат, тиолы (цистеин, эро-
тионеин); липофильные перехватчики радикалов – токоферолы, флавоноиды,
каротиноиды, убихиноны, билирубин; ферменты, осуществляющие восстанов-
ление
окисленных
низкомолекулярных
биоантиоксидантов
(глу-
татионредуктаза) или участвующие в поддержании внутриклеточного стацио-
нарного
уровня
восстановленных
эквивалентов
(глюкозо-6-
фосфатдегидрогеназа); антиоксидантные белки (церулоплазмин, альбумин,
ферритин, трансферрин, лактоферрин и др.), участвующие в хранении, транс-
порте или обезвреживании ионов металлов переменной валентности [20].
Клеточная АОС представлена семейством супероксиддисмутаз, глутати-
онпероксидаз и глутатион-S-трансфераз, а также глутатионредуктазой, найден-
ных в цитоплазме, митохондриях и ядре. Каталаза локализована в пероксисо-
мах и цитоплазме, а в такой высокодифференцированной и специализирован-
ной клетке, как эритроцит. Каталаза-фермент, катализирующий реакцию раз-
ложения перекисида водорода на воду и молекулярный кислород: Н
2
О
2
+ Н
2
О
2
= О
2
+ 2Н
2
О [48]. Каталаза представляет собой гемопротеин, простетической
группой которого является гем, содержащий ион трехвалентного железа. Моле-
кула каталазы состоит из четырех идентичных субъединиц с молекулярной
массой 60 кДа и имеет соответственно четыре простетические группы [49].
Феррипротопорфириновые группы гема прочно связаны с белковой частью
фермента — апофермектом и не отделяются от него при диализе. Оптимальная
величина рН для каталазы находится в интервале значений 6,0—8,0 [53].
Активность каталазы в эритроцитах остается постоянной при ряде забо-
леваний, однако при злокачественной и других макроцитарных анемиях увели-
чивается так называемый каталазный индекс (отношение величины каталазной
активности определенного объема крови к количеству эритроцитов в этом объ-
18
еме), имеющий существенное диагностическое значение. При злокачественных
новообразованиях отмечается уменьшение активности каталазы в печени и
почках, причем существует зависимость между величиной опухоли, скоростью
ее роста и степенью уменьшения активности каталазы. Из некоторых опухолей
выделены вещества – токсогормоны, которые при введении эксперименталь-
ным животным вызывают у них снижение активности каталазы в печени. Гене-
тически обусловленная недостаточность каталазы является одной из причин так
называемой акаталазии — наследственного заболевания, клинически прояв-
ляющегося изъязвлением слизистой оболочки носа и ротовой полости, иногда
резко выраженными атрофическими изменениями альвеолярных перегородок и
выпадением зубов [47].
Состав низкомолекулярных антиоксидантов достаточно обширен: восста-
новленный глутатион и аскорбиновая кислота находятся в водной фазе клетки,
защищая компоненты цитозоля и матрикса митохондрий, токоферолы и каро-
тиноиды – плазматическую и внутриклеточную мембраны. АФК постоянно ге-
нерируются в водной фазе плазмы крови и других биологических жидкостей.
Они могут образовываться ферментами активированных фагоцитирующих кле-
ток, в продукцию O вовлечен и сосудистый эндотелий. Активированные ней-
трофилы, кроме того, при участии миелопероксидазы генерируют внеклеточ-
ный гипохлорит [4].
В качестве компонентов неферментативной АОС могут выступать низко-
молекулярные вещества, имеющие высокую константу скорости взаимодейст-
вия с АФК [1].
Неферментативная АОС включает различные по химическому строению
и свойствам соединения:
1. Витамины Е (токоферол) и А (ретинол), каротиноиды и изопренои-
ды, которые находятся в составе клеточных мембран.
2. Церулоплазмин – белок плазмы крови, который принимает участие в
транспорте меди
3. Мочевая кислота
19
Они принимают неспаренные электроны от активных форм кислорода,
при этом образуется радикал антиоксиданта, который малоактивен. Таким об-
разом неферментативные компоненты антиоксидантной системы – это пере-
хватчики неспаренных электронов. Итак, антиоксидантная защита состоит из
ферментов, водо- и жирорастворимых веществ [26].
20
Глава 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Цель и задачи исследования
Целью данной работы являлось изучение влияния адаптогенных препа-
ратов на резистентность эритроцитарных мембран и состояние ферментатив-
ного звена антиоксидантной защиты.
Для осуществления данной цели были поставлены следующие задачи:
1. По параметрам гипоосмотических и кислотных эритрограмм изучить
влияние некоторых адаптогенов на структурно-функциональные свойства эрит-
роцитов крови крыс.
2. Оценить состояние ферментативного звена антиоксидантной системы
по активности каталазы.
2.2. Объекты и методы исследования
Экспериментальные и клинические исследования проводились на кафед-
ре физиологии человека и животных ВГУ. Объектом проведения научного опы-
та были крысы, содержащиеся в условиях вивария. Было сформировано 3 груп-
пы животных, которым ежедневно с кормом или с водой задавали препараты.
Эй-пи-ви в дозе 0,6 мл на кг массы тела, апилак - 3,3 мг на кг массы тела и ас-
корутин – 33,3 мг на кг массы тела в течение 90 суток. Для изучения структур-
но-функциональных свойств эритроцитов и определения активности каталазы
брали периферическую кровь из хвостовой вены крысы.
2.2.1. Методика регистрации гемолитических эритрограмм
Кинетику кислотного гемолиза эритроцитов изучали с помощью методи-
ки автоматической регистрации интегральных эритрограмм, разработанной на
кафедре биофизики и биотехнологии ВГУ [13].
21
Концентрацию эритроцитов доводили физиологическим раствором до
оптической плотности, равной 0.8 при =490 нм.
Принцип автоматического метода регистрации кислотных и осмотиче-
ских эритрограмм заключается в фотометрической регистрации кинетики рас-
пада эритроцитов [14]. Мерой стойкости для каждого эритроцита является вре-
мя, в течение которого происходит его разрушение. Процесс вовлечения эрит-
роцитов зависит от их структурно-функционального состояния, что позволяет
построить эритрограмму - зависимость распределения их по стойкости во вре-
мени.
Регистрацию эритрограмм осуществляли с помощью аппаратно-
программного комплекса, включающего:
- фотоэлектроколориметр ФЭК-56М со встроенным дифференциальным
усилителем;
- аналого-цифровой преобразователь L-305 фирмы L-Card;
- ЭВМ Intel Pentium III;
- цифровой вольтметр Mastech Mas830L.
Частота опроса АЦП составляла 10 Гц, регистрацию и запись эритро-
грамм осуществляли с помощью программы PowerGraph фирмы L-Card (рис. 4).
Гемолиз эритроцитов проводили в кюветах с наружными размерами
204010 мм и рабочим объёмом 4 мл. Измерение светопропускания проводили
в области 490 нм с использованием светофильтра N5, т.к. в этой области коэф-
фициент молярной экстинкции HbО
2
минимален. Следовательно, при использо-
вании спектрофотометрического метода регистрации тестируется не сам гемо-
лиз, а повреждение мембран эритроцитов: светорассеяние их растворами изме-
няется за счёт разрушения мембран и цитоскелета.
Взвесь эритроцитов для изучения осмотической резистентности получали
методом половинного разведения исходного раствора клеток крови (0,9% NaCl,
D=0,8 при =490нм) соответствующими гипоосмотическими растворами хло-
рида натрия с помощью механического дозатора Biohit с постоянным объемом
2000 мкл.
22
Аппаратно -программный комплекс для регистрации кинетических эритрограмм
фотоэлектроколориметр
ФЭК-56М
с дифференциальным
усилителем;
Плата аналого-цифрового
преобразователя
(АЦП) L-305 фирмы L-Card
цифровой вольтметр
Mastech Mas830L
ЭВМ Intel Pentium III
pH-метр
Mettler Toledo
SevenEasy
механический дозатор
Biohit с постоянным
объемом 2000 мкл
Аналитические весы
Shinko Denshi
HTR-220CE
Рис. 1. Аппаратно-программный комплекс
для автоматической регистрации кинетических эритрограмм
Для изучения кислотной резистентности эритроцитов в качестве гемоли-
тика применяли 0.1 н соляной кислоты. Выбор этого вещества обусловлен ста-
бильностью его при хранении, а также присутствием обоих ионов (Н
+
и Cl
-
) в
плазме крови. Для проведения кислотного гемолиза в рабочую кювету с сус-
пензией эритроцитов добавляли 100 мкл 0.1 Н HCl.
При проведении гемолиза эритроцитов регистрировали S-образную инте-
гральную кривую, форма которой отражала суммарное изменение величины
светорассеяния (, %) в исследуемом растворе во времени (рис. 2).
23
Рис. 2. Интегральная кривая осмотического (кислотного) гемолиза эрит-
роцитов: 1- фаза сферуляции, 2 - максимальная скорость гемолиза (Vmax), 3 -
время 50% гемолиза (t
50
), 4 - конечная фаза гемолиза. По оси абсцисс - время
гемолиза (мин). По оси ординат - степень гемолиза эритроцитов (%).
Латентный период (t
лат
) отражает процесс сфероцитоза, т.е. предгемоли-
тическое состояние эритроцитов (участок “0-1” на рис. 5). Собственно гемолиз
представляет собой процесс последовательного вовлечения всей массы эритро-
цитов в стадию гемоглобинолиза (участок “1-4”):
а) на начальном этапе происходит разрушение низкостойких эритроцитов
(участок “1-2”);
б) линейный участок S-образной кривой (участок “2-3”) отражает кине-
тику распада основной массы эритроцитов; точка “2” соответствует времени
распада эритроцитов, происходящего с максимальной скоростью.
в) появление изгиба на интегральной кривой перед выходом на плато
(участок “3-4”) характеризует кинетику разрушения наиболее стойких эритро-
цитов.
24
Промежуток времени от начала разрушения самых низкостойких клеток
(точка “1”) до конца процесса (точка “4”) отражает время собственно гемолиза.
Иногда удобнее пользоваться временем половинного гемолиза (точка “3”), (па-
раметр t
50
), т.е. время, за которое происходит распад 50% эритроцитов.
Структурно-функциональное состояние эритроцитов оценивали по сле-
дующим параметрам кинетических эритрограмм:
t
лат
- время латентного периода гемолиза (с);
G
сф
– относительное количество сфероцитов (%);
G
120
– относительное количество гемолизированных клеток за 120 с инку-
бации (%);
Gср – среднее относительное количество гемолизированных клеток за 12
мин. инкубации (%);
Gmax – максимальное относительное количество гемолизированных кле-
ток за период инкубации (%);
Статистическая обработка зарегистрированных показателей включала
расчет средних значений, дисперсии, ошибки средней величины. Статистиче-
скую обработку проводили с помощью пакета программ (Microsoft Office 2003,
приложение Excel).
2.2.2. Определение активности каталазы
Для определения активности каталазы использовали метод, основанный
на способности перекиси водорода образовывать с молибдатом аммония стой-
кий окрашенный комплекс с максимумом поглощения при 410 нм.
К 0,5 мл крови примешивали 3,5 мл. дистиллированной воды и оставляли
на 5-10 минут при комнатной температуре (основной гемолизат). Затем готови-
ли рабочий гемолизат: 0,2 мл. основного гемолизата и 3,8 мл. дистиллирован-
ной воды.
Две пробирки с 2 мл. буферно-субстратной смеси (10 мл. трис-НСl-
буфера (рН 7,4) и 30 мл 0,08% пероксида водорода) инкубировали на водяной
25
бане при 37°С 10 минут. Затем в опытную пробирку добавляли 0,1 мл. рабочего
гемолизата и снова инкубировали 3 минуты при 37°С.
Реакцию останавливали добавлением в обе пробирки по 2 мл. молибдата
аммония. После этого в контрольную пробу добавляли 0,1 мл. рабочего гемоли-
зата. Активность исследуемого фермента определяли спектрофотометрически
при длине волны 410 нм.
В качестве раствора сравнения использовали: 1 мл буфера, 3 мл дистил-
лированной воды и 0,1 мл гемолизата.
Расчет результатов производили по следующей формуле:
3*
10
*2
.
22
10
*
10
*
16
*1
.4
*)
(
*6
6
5
О
К
Е
Е
А
где А – активность каталазы, Ек – экстинкция контрольной пробы; Ео –
экстинкция опытной пробы; 4,1 – конечный объем пробы; Е/мл; 16×10
5
– фак-
тор разведения; 10
6
– коэффициент пересчета на мкм; 22,2×10
6
– коэффициент
молярной экстинкции пероксид водорода; 3 – время инкубации, соответствую-
щее 3 мин.
2.3 Результаты исследования и их обсуждение
2.3.1. Характеристика кинетики гемолиза эритроцитов крови крыс
при применении некоторых адаптогенов
По результатам наших исследований установлено, что в гипоосмотиче-
ской среде (0.45% растворе NaCl) гемолизу в течение 2-ух минут инкубации
подвергались 87,7% (Gmax) эритроцитов периферической крови контрольной
группы крыс (рис. 3).
26
-20%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
0
30
60
90
120
G
c
К
акс
эпв
апл
Обозначения: К - контрольная группа, аск - группа, принимающая аскорутин,
эпв - группа, принимающая эй-пи-ви, апл - группа, принимающая апилак
Рис.3. Кинетика осмотического гемолиза эритроцитов крови крыс при
применении некоторых адаптогенов
При применении аскорутина гипоосмотическая резистентность эритроци-
тов снижалась и гемолитическому разрушению подвергалось 92.3% клеток кро-
ви опытных животных (рис. 3).
Напротив, применение эй-пи-ви и апилака существенно повышала устой-
чивость эритроцитов лабораторных животных к гипоосмотическим условиям
(рис. 3). В группе, принимавшей водный экстракт прополиса в 0.45% растворе
NaCl гемолизу подвергалось 76.4% эритроцитов, а в группе крыс, принимавших
апилак - только 63.3%.
В группе контрольных животных и крыс, принимавших аскорутин, ско-
рость вовлечения в гемолитический процесс эритроцитов с низкой и средней
резистентностью к гипоосмотическим условиям среды была значительно выше,
по сравнению с кинетикой гемолиза у животных других двух групп (рис. 4).
27
-20%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
0
30
G
c
К
акс
эпв
апл
Обозначения: К - контрольная группа, аск - группа, принимающая аскорутин,
эпв - группа, принимающая эй-пи-ви, апл - группа, принимающая апилак
Рис. 4. Кинетика осмотического гемолиза эритроцитов
за 30 секунд инкубации
При применении эй-пи-ви и апилака скорость гипоосмотического гемо-
лиза (наклон кривой) существенно ниже, что можно рассматривать как прояв-
ление высокорезистентных структур свойств эритроцитов крови животных
данных групп (рис. 4).
По результатам наших исследований установлено, что в условиях с высо-
кой концентрацией Н
+
(рН=3.14-3.20) эритроциты крови контрольной группы
крыс и животных, принимавших аскорутин, полностью разрушаются в течение
180 с. Латентный период кислотного гемолиза клеток крови крыс контрольной
группы составил в среднем 103 с, гемолиз протекал с высокой скоростью - для
полного гемолиза потребовалось всего 60 с (рис. 5, 6).
Применение эй-пи-ви увеличивало длительность латентного периода ки-
слотного гемолиза в 1.4 раза (до 140 с), однако гемоглобинолизу в течение 240
с подвергались практически все эритроциты.
28
При применении апилака в указанный интервал регистрации (300с) в ге-
молиз вовлекались только 32 % эритроцитов (рис. 5, 6).
-20%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
0
3
0
6
0
9
0
1
2
0
1
5
0
1
8
0
2
1
0
2
4
0
2
7
0
3
0
0
G
c
К
акс
эпв
апл
Обозначения: К - контрольная группа, аск - группа, принимающая аскорутин,
эпв - группа, принимающая эй-пи-ви, апл - группа, принимающая апилак
Рис. 5. Кинетика кислотного гемолиза эритроцитов крови крыс при при-
менении некоторых адаптогенов
По параметрам полученных кислотных эритрограмм можно заключить,
что водный экстракт прополиса повышает не только структурные, но и функ-
циональные свойства эритроцитов (буферную емкость клеток, свойства белков,
прежде всего гемоглобина).
При применении апилака структурно-функциональные свойства эритро-
цитов крови крыс существенно возросли по отношению к действию кислотного
гемолитика.
По данным литературы, гемолитическое действие всех сильных кислот
обусловлено наличием химически активных ионов Н
+
, имеющих большую гид-
ратную оболочку. При повышении концентрации, благодаря своей реакционной
способности, они повреждают мембрану и через образовавшиеся поры способ-
29
ны проникать внутрь клетки [7]. Будучи осмотически активными, проникаю-
щие в эритроциты протоны Н
+
вызывают поступление экстрацеллюлярной во-
ды, что приводит к образованию сфероцитов.
-10%
-5%
0%
5%
10%
15%
20%
0
30
60
90
120
G
c
К
акс
эпв
апл
Обозначения: К - контрольная группа, аск - группа, принимающая аскорутин,
эпв - группа, принимающая эй-пи-ви, апл - группа, принимающая апилак
Рис. 6. Кинетика кислотного гемолиза эритроцитов
за 2 минуты инкубации
Далее можно предположить, что избыток протонов Н
+
нейтрализуется
буферными системами эритроцита (прежде всего гемоглобином, карбонатным
буфером и в меньшей степени белками). При этом происходит диссоциация ос-
тавшегося оксигемоглобина, что неизбежно ведет к образованию активных
форм кислорода (АФК).
Однако возможности буферных систем эритроцита ограничены, поэтому
активные протоны Н
+
будут вызывать диссоциацию гемоглобина (распаду на
димеры, мономеры, отрыву гема от глобина) и других белковых молекул. При
образовании АФК это должно сопровождаться перекисным окислением липи-
дов и окислительной модификацией белков, входящих в состав липостромати-
30
нового комплекса. Указанные процессы приводят к повышению онкотического
и осмотического давления, вызывая гемолиз эритроцитов [7,8].
2.3.2. Влияние некоторых адаптогенных препаратов на активность каталазы
К основным ферментам антиоксидантной защиты относят суперосиддис-
мутазу и каталазу. Супероксиддисмутаза катализирует реакцию превращения
супероксидных анион-радикалов до перекиси водорода, и тем самым препят-
ствуют восстановлению трехвалентного железа до двухвалентного. Избыток
перекиси водорода удаляется под действием каталазы. Каталаза локализована
в пероксисомах и цитоплазме в такой высокодифференцированной и специали-
зированной клетке, как эритроцит.
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
Контроль
Аскорутин
Апилак
Прополис
м
к
М
Н
2
О
2
/
л
*
м
и
н
Рис. 7. Активность каталазы при применении некоторых адаптогенов
В результате проведенных исследований установлено, во всех опытных
группах активность каталазы была выше, чем в контрольной группе. Так, при
применении аскорутина ее концентрация возрастала в 2,3 раза; в группе жи-
вотных, получавших апилак в 0,3 раза и в третьей опытной группе, получавшей
водный экстракт прополиса в 1,3раза (рис.7). Можно предположить, что адап-
тогенные препараты апилак и прополис могут влиять на повышение прочности
эритроцитарных мембран, стабилизируя фосфолипидный бислой, и как один из
31
механизмов этого - регуляция ферментативного звена антиоксидантной систе-
мы. В отношении аскорутина наблюдалась несколько иная картина. Известно,
что витамин С может выступать в двух формах – как прооксидант, так и анти-
оксидант, что во многом зависит от дозы ( в высоких дозах как антиоксидант) и
от обеспеченности витамином Е ( при его недостатке витамин С проявляет про-
оксидантные свойства). В данном случае, значительное повышение активности
каталазы (в 2,3%) может свидетельствовать об интенсификации свободноради-
кальных процессов, ведущих к нарушению целостности липидного слоя эрит-
роцитарных мембран. Наблюдаемое нами снижение устойчивости мембран
эритроцитов к осмотическому гемолизу можно рассматривать, как результат
усиления СРО на фоне прооксидантных свойств витамина С.
32
ВЫВОДЫ
На основании анализа результатов проведенных исследований можно
сделать следующие выводы:
1. В результате проведенных исследований было установлено, что при-
менение адаптогеннов приводит к достоверному повышению активности ката-
лазы в опытных группах животных, что может свидетельствовать об интенси-
фикации свободнорадикальных процессов.
2. Установлено, что у крыс, принимавших аскорутин, активность фермен-
та увеличилась в 2,3 раза по сравнению с контрольной группой. Применение
эй-пи-ви увеличивало активность в 1,3 раза, а при приеме апилака активность
каталазы возрастала в 0,3 раза.
3. Применение указанных адаптогенов на протяжении 90 суток вызывает
изменение структурно-функциональных свойств эритроцитов периферической
крови крыс.
4. По результатам анализа осмотических и кислотных эритрограмм мож-
но заключить, что аскорутин снижает, а эй-пи-ви и апилак повышает осмотиче-
скую и кислотную резистентность эритроцитов периферической крови крыс.
33
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Адо А. Д. Патологическая физиология / под ред. А. Д. Адо [и др.]. – Москва :
Триада – Х, 2001. – 574 с.
2. Аничков С.В. Фармалогия. Л.1969. 557с.
3. Антонов В.Ф. Структура биомембран. Липидные поры.// Соровский образов.
журн. 1998.№10(35). 13с.
4. Барабой В. А. Перекисное окисление и стресс / В. А. Барабой [и др.]. – Санкт-
Петербург: Наука, 1992. – 148 с.
5. Бойтлер Э.В. Большая медицинская энциклопедия. Советская энциклопедия.
1977. 712 с.
6. Болдырев А.А. Биологические мембраны и транспорт ионов / А.А. Болдырев.
- М.: Наука, 1985. – С. 14 - 16.
7. Вильев П.С. Роль белково-липидных комплексов и осмотического равнове-
сия в сохранности физико-химической структуры эритроцитов / П.С. Вильев,
М.П. Петрова // Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. –
Красноярск, 1960. – Вып.1. – С. 302-309.
8. Воробьев А.М. Руководство по гематологии / А.М. Воробьев, Ю.И. Лор. –
М.: Медицина. – 1979. – 438 с.
9. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы в живых системах / Ю. А. Владими-
ров [и др.] // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика, 1991. – Т. 29. – 256 с.
10. Геннис Ю.А. Биоорганическая химия / Ю.А. Геннис, Ю.А. Овчинников. -
М.: Просвещение, 1987. – 815 с.
11. Германов В.А., Писканов О.Н. Эритроциты, тромбоциты, лейкоциты. Куй-
бышев. 1996. 164 с.
12. Геннис Р. Биомембраны: молекулярная структура и функции / Р. Геннис. -
М.: Мир, 1997. – 624 с.
13. Гительзон И.И. Факторы, влияющие на стойкость эритроцитов в сосудистом
русле / И.И. Гительзон, И.А. Терсков // Вопросы биофизики, биохимии и пато-
логии эритроцитов. – Красноярск, 1961. – Вып. 2. - С. 11-29.
34
14. Гительзон И.И. Исследование функционального состояния эритрона мето-
дом эритрограмм / И.И. Гительзон, И.А. Терсков // Вопросы биофизики, био-
химии и патологии эритроцитов. – Красноярск, 1960. – С. 85 – 99.
15. Диже Г.П. Оценка антиоксидантных свойств препаратов / Г.П. Диже, И.Е.
Красовская, М.Н. Маслова // Вестник Санкт-Петербургского университета. –
2009. - №2. – С. 108-112.
16. Зайцев В. Г. Защита клеток от экзогенных и эндогенных активных форм ки-
слорода: методологические подходы к изучению / В. Г. Зайцев, В. И. Закрев-
ский // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии. –
Санкт-Петербург, 1998. – Т. 2. – С. 401-405.
17.Зайчик А.Ш. Основы патохимии / А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов. – СПб, 2001.
– С.374-383.
18. Козлов М.М., Маркин В.С. Мембранный скелет эритроцита. Теоретическая
модель. // Биологические мембраны. 1986. Т.3. №4. 110 с.
19. Конев С.В. Структурная лабильность топологических мембран и регулятор-
ные процессы. Минск. Наука и техника. 1987. 240 с.
20. Красота В. Ф. Разведение сельскохозяйственных животных / В. Ф. Красота,
Т. Г. Джапаридзе, Н. М. Костомахин. – Москва : Колос, 2005. – 450 с.
21. Кулинский В. И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация
макромолекул / В. И. Кулинский // Соровский журнал. – 2001. - №1. – С. 2-7.
22. Михайлов В.Ф., Потемкин Л.А. Оценка радиационного повреждения мем-
браны эритроцита по изменению седиментационных свойств.// Радиобиология.
1985.Т.25.вып.6. с.784-786.
23. Моисеева О.И. Транспорт кислорода кровью. // Физиол. Журн. СССР им
И.М. Сеченова. 1986. Т.72.№1.С.93-103.
24. Моррисон В. В. Патологическая физиология / В. В. Моррисон, Н. П. Чесно-
кова. – Саратов : Саратовский государственный медицинский университет,
2008. – 680 с.
35
25. Новицкий В. В. Патофизиология / В. В. Новицкий, Е. Д. Гольдберг. – Моск-
ва : ГЭОТАР-Медиа, 2009. - Т.1. – 848 с.
26. Путилина Ф. Е. Свободнорадикальное окисление / Ф. Е. Путилина [и др.]. -
Санкт-Петербург : СПБУ, 2008. – 161 с.
27. Розин М.А. Клетка и неспецифическая сопротивляемость организма. Цито-
логический анализ действия бензимедазола. Наука. Ленинград. 1976. С. 148.
28. Рыбальченко В.Н., Коганов М.М. Структура и функции мембран. Практи-
кум. Киев. 1988. С. 9-18.
29.Свободнорадикальные процессы в биосистемах / Т.Н. Попова [и др.] //
Уч.пособие. – 2008. – 192 с.
30. Смирнова Н. Г. Состояние свободнорадикального окисления и антиокси-
дантной защиты при экспериментальном холестазе / Н. Г. Смирнова [и др.] //
Хирургия, 2011, вып. 3. – С. 50-55.
31. Сыровая А. О. Биологическая роль свободных радикалов в развитии патоло-
гических состояний / А. О. Сыровая [и др.] // Международный медицинский
журнал. – 2012., №3. – С. 99-102.
32. Терехова М.В., Олейникова А.И. В кН.: Некоторые вопросы анатомии и фи-
зиологии. Алма-Ата. 1980. С.6-13.
33. Фомин Н.А. Физиология человека. М. Просвещение. 1995. 19 с.
34. Франк Г.М. Определение размеров эритроцитов методом дифракции света в
связи с проблемой биологического действия ионизирующей радиации / Б.К.
Лемажихин // Труды института биологической физики, 1955. – Вып. 1. – С.
276-287.
35. Хисматуллина Н.З. Практическая апитерапия / Н.З. Хисматуллина. - Екате-
ринбург: Уральский рабочий, 2013, - 336 с.
36. Чернецкий Г.А., Воробей А.В. Структура и функции эритроцитарных мем-
бран. Минск. 1981. С. 15-30.
37. Чижевский А.Л, Структурный анализ движущейся крови. – М.: Изд-во АН
СССР, 1959.
36
38. Янушка А.Л., Свиридов Б.Е. и др. Радиобиология./ Институт цитологии. АН
СССР. Л. 1975. С.256-258.
39. Bessis M., Mohandas N. A deffractometric method for the measurement of cellu-
lar deformability// Blood cells, 1975, V.1.№2.P. 307-313.
40. Chien S. Principles and techniques for assessing erythrocyty deformability. //
Blood cells, 1977. V. 3. P. 71-99.
41. Freidovich I. Fundamental aspects of reactive oxygen species, or what’s the mat-
ter with oxygen // Ann. N. Y. Acad. Sci.— 1999.— Vol. 13.— P. 893–895.
42. Halliwell B. J. Free radicals in Biology and Medicine / B. J. Halliwall, M. C. Cut-
teridge // Oxford : Oxford University Press. – 1999. – 937 p.
43. Halliwell B. J. Free radicals and antioxidants: updating a personal view / B. J.
Halliwall // International Life Sciences Institute. – 2012. – P. 257-265.
44. Harman D. The aging process./ D. Harman // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. –
1981. - 78 p.
45. Harman D. Aging: a theory based on free radical and radiation chemistry / D.
Harman // Journal of Gerontology. – 1956. – P. 298–300.
46.Harman D. A biologic clock: the mitochondria? / D. Harman // Journal of the
American Geriatrics Society. – 1972. – P. 145-147.
47. Harman D. Free radical theory of aging / D. Harman // Mutat. Res. – 1992. – 257
p.
48. Hekimi S. Taking a "good" look at free radicals in the aging process / S.
Hekimi, J. Lapointe, Y. Wen // Trends Cell Biol. – 2011. – 569 p.
49. Mimić-Oka J., Simić D. V., Simić T. P. Free Radicals in cardiovascular disease //
Series Med. and Biol.— 1999.— Vol. 6, № 1.— Р. 11–22.
50. Moor K. Blaine, Shriver Stephaneiek.// Biochem and Biophys. Res. commun.
1997. 232. №2. Р.294-297.
51. Paeker L. Free Radicals in the Brain Aging / L. Packtr, L.Prilipko, Y. Christen //
Neurological and Mental Disorders. – Berlin; New York: SpringerVerlag, 1992. –
P.21-41.
37
52. Sheetr M., Sasely J. 2-3 DPG and ATP dissociate erythrocytes membrane. // J.
Bios. Chem. 1980. V.225.№26.P. 9925-9960.
53. Speakman JR. The free-radical damage theory: Accumulating evidence against a
simple link of oxidative stress to ageing and lifespan / JR. Speakman, Selman C. //
Bioessays. – 2011. – 255 p.
54. Vissers M.C.M. Oxidative damage fibronectin. 2. The effect of H2O2 and hydro-
hyl radikal / M.C.M. Vissers, C.C. Winterbourn // Arch. Biochem and Biophis. –
1991. – V.285, №1. –P.357-365.
55. Welsh C.F., Zhu D. and Bournuignon L. (1995). J. Cell Physiol. 164 605-612.
Информация о работе Влияние некоторых адаптогенов на структурно-функциональные свойства эритроцитов периферической крови крыс